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研究背景和目的:结直肠癌(CRC)是临床常见的恶性肿瘤之一,因为其发病率及死亡率较高,已经威胁到人类健康[1];结直肠癌的侵袭转移机制,涉及多个阶段并由多种基因参与,是一个复杂的生物学过程;肿瘤出芽作为恶性肿瘤重要的形态学特征,它的出芽程度可以间接提示结直肠癌的侵袭和转移,并且与不良预后有关[2]。研究表明,癌细胞的侵袭转移,依赖于侵袭性伪足(Invadopodia)的形成,细胞膜下肌动蛋白的装配(Actin assembly)调控这一过程[3];迄今为止,已经发现众多基因参与,ARP2/3复合物的催化作用是重要的关键环节[4],已经研究证明,它可以受WASP(Wiskott-Ardrich综合征蛋白)家族的激活[5]。LASP1(LIM and SH3 protein 1)是我们课题组研究的结直肠癌相关转移蛋白[6],前期研究发现,LASP1可以结合并激活WASP(Wiskott-Ardrich综合征蛋白)家族。本研究以WASP(Wiskott-Ardrich综合征蛋白)家族在结直肠癌肿瘤组织的高表达为切入点,通过临床与基础实验相结合,旨在揭示WASP参与结直肠癌侵袭转移的重要作用,为肿瘤临床预后及治疗提供新的生物学靶标。研究方法:1、免疫组织化学(IHC)研究 WASP(Wiskott-Alrich Syndrome Protein)、N-WASP(neural-Wiskott-Alrich Syndrome Protein)在结直肠癌组织的表达;N-WASP的表达高低对结直肠癌免疫微环境以及侵袭性前沿的相关性;N-WASP、LASP1、ARP3在结直肠癌的表达及临床预后;2、构建稳定N-WASP、LASP1过表达和N-WASP干扰细胞株RKO,Western Blot检测其表达及相关性;3、裸鼠皮下成瘤和腹腔肠系膜原位种植,探讨N-WASP对肿瘤体内侵袭转移能力的影响;4、免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)方法验证 N-WASP 与 LASP1 的相互作用及结构域;5、Co-IP、免疫荧光(IF)验证 LASP1、SH3(LASP1 结构域)促进N-WASP与ARP3的结合;结果:1、IHC实验发现结直肠癌瘤组织低表达甚至无表达WASP,NWASP高表达;N-WASP在结直肠癌瘤组织高表达;其表达与淋巴结转移、炎症反应及肿瘤侵袭模式、肿瘤出芽分级相关;2、裸鼠皮下瘤及腹腔肠系膜原位种植实验,N-WASP促进结直肠癌的侵袭及转移;3、CO-IP实验,LASP1通过其SH3结构域与N-WASP结合;4、CO-IP、IF实验,过表达LASP1或SH3与对照组相比,促进N-WASP与ARP3的结合,强度依次是强、中、弱;5、IHC证明N-WASP、LASP1表达与淋巴结转移相关;ARP3在肿瘤组织高表达;N-WASP、LASP1、ARP3三者在结直肠癌组织的表达具有正相关性。结论:1、N-WASP在结直肠癌瘤组织中高表达;2、N-WASP高表达与结直肠癌微环境及肿瘤出芽相关;3、N-WASP促进结直肠癌的侵袭和转移;4、N-WASP通过与LASP1的结构域SH3结合,从而促进N-WASP与ARP3的结合;5、N-WASP、LASP1的表达与临床预后有关,N-WASP、LASP1及ARP3三者表达呈正相关。创新性:1、基础联系临床,验证N-WASP在结直肠癌侵袭转移的作用及潜在机制;2、提出N-WASP在结直肠癌的高表达与肿瘤出芽相关。