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研究背景与目的凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosisprotein,IAP)是一类含众多成员的凋亡抑制蛋白家族,在抑制凋亡和促进肿瘤细胞增生中起着重要的作用。Livin是新发现的IAP家族成员之一,像其它IAP成员一样主要是通过和Caspase蛋白结合,例如caspase-3、caspase-7和caspase-9,从而抑制其级联激活反应而发挥抗凋亡作用。据研究发现Livin在各种肿瘤细胞和转化细胞有高表达,在大多数正常分化组织中低表达或不表达,这种凋亡抑制基因的分布可能导致肿瘤的进展。这一表达的特异性使Livin基因成为目前国际研究的热点。Casitas B-lineage lymphoma (Cbl)是一类广泛分布的细胞内蛋白,在哺乳类中有c-Cbl、Cbl-b和Cbl-3三种。Cbl家族拥有N端的TKB结构域介导与多种受体型蛋白酪氨酸激酶的结合,并有个作为泛素结合酶E3的RING结构域。因此正常情况下Cbl的这种负调控PTK作用对于维持细胞内稳机制具有重要意义。近年来的研究表明,突变的Cbl可成为癌基因,其可以与激活的受体型蛋白酪氨酸激酶(RTK)相互作用而导致肿瘤的发生。c-cbl最近被证明是泛素-蛋白酶体(ubiquitin-proteasome)通路中的一个新的RING Finger型泛素连接酶(ubiquitin ligase , E3)。c-cbl可以介导受体酪氨酸激酶和非受体酪氨酸受体激酶的降解。目前,在白血病方面对livin基因和c-cbl基因的研究尚较少。本研究旨在检测Livin和c-cbl mRNA在白血病中表达并分析其临床意义。研究内容和方法1、细胞培养用DMEM高糖培养基37℃,5%CO2培养复苏后的M14细胞,用于提取总RNA用作RT-PCR检测Livin基因的阳性对照。2、把克隆的livin基因片段连接到质粒PMD20-T vector,构建阳性对照质粒。3、应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测了67例急性白血病患者及13例慢性粒细胞白血病患者的骨髓或外周血单个核细胞Livin和c-cbl基因mRNA表达水平。其中初发ANLL患者47例(初治组),有45例可进行疗效评估(2例未治疗),其中30例化疗1疗程达CR(缓解组) ,缓解组中4例于观察期间复发(复发组);初发ALL患者20例(初治组),有17例可进行疗效评估(3例未治疗),其中14例化疗1疗程达CR(缓解组) ,缓解组中3例于观察期间复发(复发组),20名健康人作为正常对照(NC)。结果1.成功建立稳定、特异检测livin基因和c-cbl基因表达的RT-PCR方法。2. ANLL患者中,livin基因mRNA表达率为66.0%(31/47例);CML患者livin基因mRNA表达率为61.5%(8/13例); ALL患者中,livin基因表达率为75.0%(15/20例)。对照组20例的livin mRNA表达为阴性。ANLL、CML、ALL之间livin mRNA的表达率比较无统计学差异(P>0.05)。3. C-cbl mRNA在ANLL细胞中的表达c-cbl mRNA在初治ANLL中阳性率为57.4%(27/47),在正常人中的表达率为100.0%(20例全部阳性);两组相比差异具有显著性(P<0.005)。ALL患者中,c-cbl基因阳性率为55..0%(11/20例)。CML患者c-cbl基因mRNA阳性率为61.5%(8/13例);ANLL、CML、ALL之间livin mRNA的表达率比较无统计学差异(P>0.05)。结论1.初治急性白血病患者Livin mRNA表达水平明显高于正常对照组,复发组表达水平明显高于正常对照组,但与初治组无显著差别。livin基因表达阳性的患者完全缓解率较livin基因表达阴性的患者低。提示livin可能作为急性白血病的发病、复发及预后判断的指标之一。2.初治急性白血病患者c-cbl mRNA表达水平明显低于正常对照组,复发组表达水平明显低于正常对照组,但与初治组无显著差别。c-cbl基因低表达的患者完全缓解率低,预后不良;提示c-cbl和急性白血病的发病、复发有一定的关联。3.慢性粒细胞白血病Livin mRNA表达水平明显高于正常对照组,c-cbl mRNA表达水平明显低于正常对照组,提示livin基因和c-cbl和慢性粒细胞白血病的发病有一定的关联。