目的:肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引起手足口病的重要病原体,类属于小核糖核酸病毒科、肠道病毒属。它是单股正链RNA,约7500个碱基核苷酸。由于该病毒感染可致婴幼儿发生严重的中枢神经系统并发症甚至死亡,因此受到我国政府的广泛关注。目前为止,针对EV71尚无有效的治疗药物。近年来有研究发现,传统中药及其他天然产物中的—些有效成分可以抑制病毒的复制,尤以黄酮类化合物为主,后者种类繁多效用广泛。本研究旨在寻找有效抑制EV71复制的天然化合物,并探讨其可能的机制。方法与结果:从含有502种化合物的小分子化合物库中筛选发现能有效抑制EV71复制的两种类黄酮类物质—芹菜素(Apigenin)和木犀草素(Luteolin)。实验表明二者均具有抑制EV71引起的细胞病变效应及EV71复制的能力;通过In-cell Western、Realtime-PCR和结晶紫实验,发现在RNA和蛋白质水平上,芹菜素和木犀草素均可以抑制EV71的复制以及病毒复制诱导的细胞病变效应;虽然这两种化合物表现出相同的抗EV71复制的活性,但其结构上仅有一个羟基数量的差异,而导致具体的抗病毒机制截然不同。为进一步探索芹菜素和木犀草素的抗病毒机制,首先通过细胞凋亡检测实验、Western blot及细胞内活性氧检测实验,发现芹菜素和木犀草素均能降低EV71诱导的凋亡细胞比例及细胞内活性氧自由基的水平;应用细胞转染技术和Luciferase活性检测实验,对病毒的2Apro和3Cpro蛋白酶相关活性进行检测分析,发现芹菜素和木犀草素对2Apro和3Cpro蛋白酶的活性均无明显影响;通过双顺反子表达实验,分别将两种化合物对EV71 IRES活性影响进行检测,结果表明:芹菜素可以明显降低EV71 IRES活性,而木犀草素无此作用;通过Western blot发现芹菜素能有效地抑制EV71诱导的细胞内丝氨酸苏氨酸激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)的激活,而木犀草素对激活的JNK无明显影响。结论:芹菜素具有抗EV71活性,其机制可能通过影响病毒的IRES活性和调节细胞JNK通路活性作用完成。