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在猪上,脂肪库主要由皮下脂肪和内脏脂肪以及肌肉组织中的肌间脂肪和肌内脂肪组成。骨骼肌内的脂肪沉积强烈影响肉的品质。迄今为止,很多的研究已经找出影响该性状的关键因素和基因,显示出生理上控制肥胖的复杂性。胞内脂质以甘油三酯的形式存在于脂肪滴中,脂肪滴是一种动态的细胞器,对细胞能量稳态的维持起到重要的作用。脂肪分化相关蛋白(ADRP)是促进细胞内脂滴的形成,参与脂类存储的脂滴相关蛋白。猪ADRP使脂肪沉积的候选基因,影响胴体品质和肉质。为了研究猪ADRP基因对肌内脂肪含量的作用,我们通过PCR扩增和克隆获得了 ADRP基因的序列,利用生物信息学方法预测可ADRP蛋白的结构和功能,并且构建了系统发生树,以揭示不同物种的进化关系。然后我们构建了启动子缺失表达载体,并通过荧光素酶报告系统检测ADRP的核心启动子区域。我们利用亚硫酸氢盐测序的方法检测了肌内脂肪含量不同(FAT和LEAN)组中ADRP基因核心启动子区甲基化状况。在猪前体脂肪细胞中,过表达ADRP基因后,通过油红O染色和RT-PCR技术,研究ADRP基因对猪前体脂肪细胞分化的影响。结果如下:1猪ADRP基因的生物信息学分析猪的ADRP基因位于1号染色体上,包含8个外显子和7个内含子。猪的ADRP基因mRNA含有1377bp的开放阅读框,编码459个氨基酸。猪ADRP蛋白没有信号肽、跨膜区和疏水区,位于细胞质中。2猪ADRP5’端调控区序列克隆与启动子活性分析我们克隆猪的ADRP5’端1719bp序列,以此序列为基础,构建五个双荧光素酶报告基因表达载体,瞬时转染C2C12和PK15细胞中,结果表明,猪脂肪分化相关蛋白的核心启动子位于转录起始位点上游-234至-926bp之间,转录因子预测发现,含有YY1和Sp1等转录因子结合位点,其中这两个位点为甲基化敏感位点。3猪ADRP基因CpG岛甲基化分析肌内脂肪含量较高组(FAT组)中ADRP基因5’端启动子区CpG位点的甲基化程度为66.67%,肌内脂肪含量较低组(LEAN组)中ADRP基因5’端启动子区CpG位点的甲基化程度为74.76%,LEAN组甲基化程度高于FAT组,但是差异不显著(p>0.05)。在分析的21个CpG位点中,第7、10、12位点的甲基化水平在FAT与LEAN组中差异极显著(p<0.01),其中FAT组甲基化为46.7%,LEAN的甲基化为86.67%。结果说明,猪ADRP基因启动子区甲基化对mRNA的表达起到调控作用。4过表达ADRP基因对前体脂肪细胞分化的影响在猪前体脂肪细胞中,过表达ADRP基因后,通过油红O染色和RT-PCR技术,研究ADRP基因对猪前体脂肪细胞分化的影响。油红O染色显示,过表达ADRP后脂肪细胞的脂滴积聚明显高于转染空载体组。对脂肪细胞分化的标记基PPARγ和FABP4进行Real-time PCR检测,转染ADRP过表达组中的表达量明显高于转染空载组。