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骨折延迟愈合、不愈合、骨缺损与骨质疏松症临床治疗效果不理想。近年来,现代骨组织工程学迅速发展,为解决这些难题提供了可能。组织种子细胞的获得、培养与分化是此工程的基础。研究者寻找到具有强大的体外增殖力和多向系分化潜能的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)。由于hBMSCs可在体外培养并能在植入体内后成骨,故骨组织工程以hBMSCs作为种子细胞应用于临床已成为趋势。将诱导成骨因素应用于骨组织工程,是近年来该工程研究的一个主要课题。自古以来,骨碎补就作为一种骨伤科的良药应用于临床。现代研究证实骨碎补能促进成骨,但机制不清楚。骨碎补种类有12种以上,制剂工艺多样,各种成品活性成分各异。研究发现,柚皮甙是骨碎补的主要活性成分,本课题以柚皮甙为研究对象,探讨其诱导hBMSCs分化为成骨细胞与骨细胞的影响和机制。 第一章 人骨髓间充质干细胞的分离、体外培养及生物学特性的观察 目的 分离、培养hBMSCs,观察传代与年龄对hBMSCs生物学特性的影响。 方法 利用公认的hBMSCs分离方法密度梯度离心法配合贴壁筛选法、细胞形态学观察、免疫细胞化学染色、流式细胞术检测细胞表面标志和后期诱导hBMSCs分化结果等方法鉴定所分离、培养的为hBMSCs。按供体年龄分为A、B两组。用倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞的一般形态、