在新药开发过程中，探究该药物与其它药物的代谢相互作用，是评价药物安全性和有效性的一个重要组成部分。本论文建立了测定六种主要CYP酶亚型探针性底物代谢产物的LC／MS／MS法，用于评估药物对CYP酶的抑制及诱导能力。本论文阐明了一种新的抗炎候选药物血小板活化因子（PDF）拮抗剂IMM018对肝CYP酶的影响，及其在大鼠和犬体内的动力学过程，研究了IMM018在大鼠体内的排泄和组织分布，为IMM018的药理、毒理和临床研究提供参考依据。氢吗啡酮（hydromorphone，HYD）为半合成的阿片受体拮抗剂。本文建立了液相色谱-串联质谱法测定比格犬给予HYD缓释制剂后血浆中HYD的浓度，用于评价其缓释特征。一、LC／MS／MS法测定六种CYP酶探针底物的代谢产物体外药物相互作用研究数据可以用于指导临床药物相互作用研究，或者指导新化合物的合成设计，为此必须确保所获得的体外数据真实可信。本论文使用重组CYP酶，与探针性底物非那西丁（CYP1A2），甲苯磺丁脲（CYP2C9），美芬妥英（CYP2C19），右美沙芬（CYP2D6和CYP3A4-D），氯唑沙宗（CYP2E1），咪达唑仑（CYP3A4-M）孵化，建立快速测定孵化液中各探针性底物代谢物的液相色谱-串联质谱分析方法（LC／MS／MS），用于新候选药物对六种主要CYP酶的抑制及诱导筛选研究，并对分析方法进行了确证。通过对质谱条件、色谱条件以及样品预处理方法的考察优化了分析方法。该法的线性范围为1.0～2000 ng·mL^-1，定量下限1.0 ng·mL^-1，日内和日间精密度（RSD）在3.4％～13.9％之间，准确度在-5.3％～7.3％之间。应用本文建立的分析方法测定了六种CYP酶的阳性抑制剂的IC₅₀值，获得结果与文献相符，进一步证实了方法的准确性。二、IMM018对肝CYP酶的影响本文对IMM018的药物代谢性相互作用进行了研究：利用人源重组CYP酶，考察了IMM018对CYP1A2，CYP2C9，CYP2D6和CYP3A4酶的抑制作用；同时通过测定连续3天灌胃给予低、高剂量IMM018(50和100 mg·kg^-1·d^-1后，大鼠肝CYP酶的活性，并与空白对照组进行比较，考察IMM018对大鼠肝CYP酶的诱导影响。采用LC／MS／MS法测定孵化样品中CYP1A（非那西丁O-去乙基），CYP2C（甲苯磺丁脲4-羟基化），CYP2D（右美沙芬O-去甲基）以及CYP3A（右美沙芬N-去甲基，咪达唑仑1′-羟基化）酶的活性。抑制试验结果表明IMM018对CYP1A2的IC₅₀为47.1μmol·L^-1，K_i为13.1μmol·L^-1，属于混合型抑制；对CYP2C9的IC₅₀为29.7μmol·L^-1，K_i为20.2μmo1·L^-1，属于非竞争性抑制；对CYP2D6的IC₅₀为5.4μmol·L^-1，K_i为10.0μmol·L^-1，属于非竞争性抑制。诱导实验结果显示给药组与空白对照组CYP1A，CYP2C和CYP2D酶活性无显著性差异（p＞0.05），给药组与空白对照组CYP3A酶活性有显著性差异（p＜0.05），给药低、高剂量组之间也存在着一定的差异（p＜0.05）。IMM018对测试的4种CYP同工酶均具有中等程度的抑制作用，且对CYP3A4抑制具有时间依赖性及底物依赖性；对大鼠肝CYP3A具有诱导作用，且存在轻微的剂量依赖性。三、IMM018在大鼠和犬体内的药物动力学研究以苯海拉明（diphenhydramine）为内标，建立同时测定生物样品中IMM018及其五种Ⅰ相代谢物的液相色谱-串联质谱法（LC／MS／MS），并进行了完整的方法确证。通过对质谱条件、色谱条件以及样品预处理方法的考察优化了分析方法。色谱柱为Gemini-C₁₈柱（150×4.6 mm I．D．，5μm），以甲醇：水：甲酸（50：50：0.25．v／v）为流动相，流速为0.5 mL·min^-1。采用电喷雾离子源（ESI源），以正离子方式检测，扫描方式为选择反应监测（SRM）。该法测定IMM018及其代谢物M3，M4和M5的线性范围为3.0～4000 ng·mL^-1，定量下限3.0 ng·mL^-1；M2的线性范围为4.0～40000 ng·mL^-1，定量下限4.0 ng·mL^-1；M1的线性范围为0.4～4000 ng·mL^-1，定量下限0.4 ng·mL^-1。IMM018及其代谢物M1～M5的日内和日间精密度在2.0％～14.7％之间，准确度在-4.1％～4.3％之间。本文建立的方法在灵敏度、动态范围和测试速度等方面均达到生物样品分析方法的要求。采用建立的分析方法研究了IMM018及其代谢物在大鼠和犬体内的药物动力学。大鼠灌胃给予IMM018(25 mg·kg^-1)后，在血浆中仅在个别时间点检测到原形药物(低于100 ng·mL^-1)，生成的主要代谢产物为M1，M2及M3。代谢物M1，M2和M3消除半衰期分别为4.49，2.67和2.79 h。大鼠静脉注射给予IMM018(25 mg·kg^-1)后，代谢物M1，M2和M3在血浆中t_1／2分别为5.69，4.38和3.43 h。犬灌胃给予IMM018(7.5 mg·kg^-1)后，代谢物M1，M2和M3消除半衰期分别为0.31，3.29和5.14 h。犬静脉注射给予IMM018(7.5 mg·kg^-1)后，代谢物M1，M2和M3在血浆中t_1／2分别为0.512，4.76和2.36 h。四、IMM018在大鼠体内的排泄和组织分布研究为了进一步了解IMM018在大鼠体内的生物转化过程，建立了测定尿，粪和胆汁中IMM018及其主要代谢物的LC／MS／MS法，并且研究了IMM018自大鼠体内的排泄情况，根据尿和胆汁的排泄体积以及粪的排泄质量计算IMM018及其代谢物的排泄量、累积排泄量、累积排泄率。大鼠灌胃给予50 mg·kg^-1 IMM018 60 h后，在尿中未检测到原形药物，可检测到代谢物M2、M3、M1（按代谢物在尿中排泄量从大到小顺序）及微量M4和M5。尿中代谢物累积排泄总量约占剂量的79.7％，其中代谢物M2累积排泄量约占剂量的75.9％；代谢物M3累积排泄量约占剂量的3.24％；代谢物M1累积排泄量约占剂量的0.57％；代谢物M4累积排泄量约占剂量的0.0097％；代谢物M5累积排泄量约占剂量的0.012％。大鼠灌胃给予50 mg·kg^-1 IMM018 60 h后，在粪中可检测到少量原形、代谢物M2、M3、M1、M4及微量M5。粪中原形及代谢物累积排泄总量约占剂量的2.43％，其中原形药物累积排泄量约占剂量的0.050％；代谢物M2累积排泄量约占剂量的2.17％；代谢物M3累积排泄量约占剂量的0.17％；代谢物M1累积排泄量约占剂量的0.00404％；代谢物M4累积排泄量约占剂量的0.035％；代谢物M5累积排泄量约占剂量的0.00091％。大鼠灌胃给予50 mg·kg^-1 IMM018 60 h后，在胆汁中可检测到少量原形及代谢物M2、M3、M1、M4。胆汁原形及代谢物累积排泄总量约占剂量的6.00％，其中原形药物累积排泄量约占剂量的0.17％；代谢物M2累积排泄量约占剂量的1.97％；代谢物M3累积排泄量约占剂量的0.15％；代谢物M1累积排泄量约占剂量的3.69％；代谢物M4累积排泄量约占剂量的0.01％。排泄试验结果表明，大鼠灌胃给予IMM018后主要以代谢物M2形式由尿中排泄。IMM018自大鼠体内排泄较快，不易在体内蓄积。为了研究IMM018在大鼠体内的分布情况，建立了测定大鼠组织中IMM018及其代谢物浓度的LC／MS／MS法，对大鼠灌胃给药后药物在体内的分布情况进行了研究。大鼠灌胃给予IMM018后，1.0，4.0，12 h三个时间点IMM018在各组织中的浓度很低。各代谢物在各组织中广泛分布，在胃内容物及肠内容物中除发现大量原形外，还发现代谢物M1＞M2＞M5＞M4＞M3（按代谢物浓度从大到小顺序），1h时胃内容物中代谢物M1的量约为原形的7％。1 h时除胃壁、肠内容物、胃内容物外，M2在各组织中的浓度均高于原形，M3浓度次之；在采集的三个时间点样品中，IMM018各代谢物M1、M2、M4及M5，除子宫、卵巢外，其余组织均在1 h达到最大组织浓度；代谢物M3，除大肠及生殖器外，其余组织均在1 h达到最大组织浓度。相对于血浆浓度，IMM018各代谢物在大多数组织中浓度较高，特别是在胃肠道、肺、子宫、心、膀胱、胰腺和肝组织中有较高的浓度。代谢物M2、M1和M5在胃肠道中吸收较快，在4 h时的胃内容物药物浓度约为1h药物浓度的25％，小肠内容物约为1 h药物浓度的14％。各代谢物在组织中消除迅速，12 h时代谢物M1在心、肝、肾、脂肪、小肠、大肠、胃壁、卵巢、胰腺的浓度降为1 h时的百分之一。原形及代谢物在脑组织中含量低，说明药物不容易通过血脑屏障。五、氢吗啡酮缓释制剂在犬体内的药动学研究氢吗啡酮（hvdromorphone，HYD）是一种半合成的阿片受体拮抗剂。本实验建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法测定比格犬血浆中氢吗啡酮。比格犬血浆0.1 mL经β-葡糖苷酸酶孵化16 h后，采用液-液萃取法处理，以甲醇：水：甲酸（65：35：1）为流动相，Zorbax SB C₈柱分离，采用大气压化学电离源，选择反应监测（SRM）。测定氢吗啡酮的线性范围为0.80～200.0 ng·mL^-1，定量下限为0.80 ng·mL^-1。日内、日间精密度（RSD）在2.6％～5.3％之间，准确度（RE）在-0.2％～1.0％之间。应用此法研究了6只比格犬单剂量口服盐酸氢吗啡酮缓释片4mg后的药物动力学特点。该法选择性强，灵敏度高，适用于氢吗啡酮缓释制剂的药代动力学研究。