COX-2对棕榈酸或油酸诱导重新脂化HSC-T6 Acsl家族基因表达的影响

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目的:本章主要探讨棕榈酸或油酸对重新脂化HSC-T6的影响及COX-2在棕榈酸或油酸诱导的HSC-T6重新脂化过程中对各种Acsl表达影响。方法:1、使用含有200mmol/L棕榈酸或20μg/ml油酸的DMEM培养基处理HSC-T6;油红O染色检测棕榈酸和油酸干预48小时后HSC-T6细胞内脂滴的变化,观察棕榈酸和油酸对HSC-T6细胞重新脂化的影响。2、利用本实验构建的pYr-1.1-COX-2shRNA,将其转染至HSC-T6中,然后在荧光显微镜下观察并评估其转染效率。3、Western Blot:COX-2shRNA干扰COX-2的表达后再分别给予棕榈酸或油酸处理细胞,Western blot检测各组HSC-T6细胞内COX-2,Acsl1,Acsl3,Acsl4,Acsl5,Acsl6的表达。结果:1、200mmol/L棕榈酸或20μg/ml油酸干预48小时后均能够促进HSC-T6内脂滴的增多;棕榈酸干预组脂质沉积明显高于空白对照组,两者比较具有显著性差异(P <0.05);油酸干预组脂质沉积明显高于空白对照组,两者比较具有显著性差异(P <0.05)。2、转染48h后COX-2shRNA在荧光显微镜下观察转染效率达70%以上,符合本实验要求。3、200mmol/L棕榈酸或20μg/ml油酸能够上调了HSC-T6中COX-2的表达;油酸干预组明显高于空白对照组,两者比较具有显著性差异(P <0.05);棕榈酸干预组明显高于空白对照组,两者比较具有显著性差异(P <0.05);与棕榈酸处理组或者油酸处理组比较,COX-2shRNA+棕榈酸和COX-2shRNA+油酸明显降低了COX-2的表达,两者比较具有显著性差异(P <0.05)。4、200mmol/L棕榈酸或20μg/ml油酸能够上调HSC-T6中Acsl1,Acsl5, Acsl6的表达,具有显著性差异(P <0.05);棕榈酸处理组和油酸处理组均对Acsl3、Acsl4的表达无作用,统计无意义(P>0.05);与棕榈酸处理组和油酸处理组比较,COX-2shRNA+棕榈酸组和COX-2shRNA+油酸组进一步上调Acsl5、Acsl6的表达,具有显著性差异(P <0.05);与棕榈酸组和油酸组比较,COX-2shRNA+棕榈酸组和COX-2shRNA+油酸组对Acsl1、Acsl3、Acsl4的表达无作用,统计无意义(P>0.05)。结论:1、棕榈酸或油酸均能够诱导HSC-T6重新脂化。2、棕榈酸或油酸均能够上调HSC-T6中Acsl1、Acsl5、Acsl6的表达。3、COX-2对棕榈酸或油酸上调Acsl5、Acsl6的表达具有拮抗作用。
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