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目的：生乳营养物质丰富，微生物繁殖速度快。传统的检测方法操作繁琐、耗时长，给企业的正常生产带来不便，甚至经济损失。所以要求一种能在短时间内检测出微生物的方法。本课题旨在研究利用流式细胞术快速检测生乳中的细菌总数和大肠杆菌两个微生物指标。方法：本研究首先建立生乳前处理方法用来排除生乳中大颗粒物质对流式细胞仪检测的干扰；利用PI对全部细菌进行染色，利用荧光抗体ab30522对大肠杆菌进行特异性染色，并对染色条件进行摸索；在流式细胞仪的EXPO32 ADC操作系统上建立微生物的检测程序；利用流式细胞术检测细菌总数、大肠杆菌分别与平皿菌落计数法、MPN法进行比较分析。结果：研究结果如下：1．生乳前处理方法：取一定量生乳用300目尼龙膜过滤；取200μl生乳置于EP管中，加蛋白酶K(20mg／ml)5μl、TritonX-100 1μl，50℃消化15min；加800μl 0.1M PBS(pH=7.2)；100℃沸水浴5min；14000g离心5min(或10min)，微量进样器小心移去脂肪层和上清，保留沉淀(沉淀即细菌)。注：当检测乳中总菌数时热处理的参数为100℃沸水浴5min；当检测乳中大肠杆菌时热处理的参数为100℃沸水浴10min。2．流式细胞术检测生乳中细菌总数的检测流程：生乳前处理；加190μl的0.1MPBS(pH=7.2)重悬沉淀；加PI染液(20μg／ml)10μl，避光染色5min；将样品移入流式管中，0.1MPBS适当稀释；利用EXPO32 ADC操作系统进行分析。3．流式细胞术检测生乳中大肠杆菌的检测流程：生乳前处理；用稀释倍数为100倍的荧光抗体ab30522 100μl染色20min，0.1M PBS适当稀释。利用EXPO32 ADC操作系统进行分析。4．流式细胞术检测生乳中细菌总数的检测时间为40min；流式细胞术检测生乳中大肠杆菌的检测时间为60min。5．流式细胞术的最低检测限为单位体积1个细胞；样品中细菌浓度的检测上限是2.4×10~7／ml，检测结果接近2.4×10~7／ml的样品应该适当稀释再进行检测。6．将流式细胞术检测生乳中细菌总数与平皿菌落计数法进行比较，结果表明两者呈正的直线相关(P＜0.01)，相关程度为显著相关(r=0.9360)；流式细胞术检测生乳中大肠杆菌和MPN法检测结果的对数值具有显著的相关性(r=0.96，P＜0.01)，两者拟合的回归方程为y=1.2443x-1.4718。结论：流式细胞术能够极大程度上缩短检测时间，能够达到生乳样品进行在线检测的要求。流式细胞术的结果与传统方法检测的结果具有显著的相关性，结果可靠。