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目的:探讨研究结核分枝杆菌Pho PR双组分系统过表达对结核分枝杆菌致病性的影响及其机制。方法:构建及鉴定重组穿梭质粒p MV361-Pho P和p MV361-Pho R,利用电转化技术将重组穿梭质粒分别导入至H37Rv和H37Ra的感受态细胞中构建过表达菌株,并利用实时荧光定量PCR技术进行检测和鉴定,将各过表达各菌株及对照菌株分别感染巨噬细胞,通过CFU菌落计数方法检测各菌株在被感染巨噬细胞内的增殖能力,通过流式细胞技术检测被感染巨噬细胞的凋亡率。结果:1.构建及鉴定了重组穿梭质粒p MV361-Pho P、p MV361-Pho R;2.构建及鉴定了Pho PR双组分系统中Pho P/Pho R基因过表达的H37Rv::Pho P菌株,H37Rv::Pho R菌株,H37Ra::Pho P菌株,H37Ra::Pho R菌株;3.CFU菌落计数检测结果显示:与对照组H37Ra菌株组菌落计数相比较,H37Ra::Pho P菌株组在感染的第0.5天无显著变化,在感染的第1天、第3天菌落数显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05);H37Ra::Pho R菌株组在感染的第0.5天、第1天、第3天均无显著变化。与对照组H37Rv菌株组菌落计数相比较,H37Rv::Pho P菌株组在感染的第0.5天无显著变化,在感染的第1天、第3天菌落数显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05);H37Rv::Pho R菌株组在感染的第0.5天、第1天、第3天均无显著变化;4.流式细胞技术检测结果显示:与对照组H37Ra菌株组相比较,H37Ra::Pho P菌株组在感染的1h、12h、24h均无显著变化;在感染的6h有显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);H37Ra::Pho R菌株组在感染的1h、6h、12h、24h均无显著变化。与对照组H37Rv菌株组相比较,H37Rv::Pho P菌株组在感染的1h、6h、12h、24h均无显著变化;H37Rv::Pho R菌株组在感染的1h、6h、12h、24h均无显著变化。结论:1.成功构建了重组穿梭质粒p MV361-Pho P和p MV361-Pho R;2.成功构建了Pho PR双组分系统中Pho P/Pho R基因过表达的H37Rv::Pho P菌株,H37Rv::Pho R菌株,H37Ra::Pho P菌株,H37Ra::Pho R菌株;3.MTB Pho PR双组分系统中Pho P基因过表达可能使MTB的致病性增强,Pho R基因过表达对MTB的致病性无明显影响。