中药植物茅苍术抗菌活性及活性物质研究

来源 :广西师范大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:calvinly1989718
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本文以茅苍术Atractylodes lancea (Thunb.)DC为研究对象,用有机溶剂冷浸提取法提取植物成分。以玉米大斑病菌Exserohilum turcicum (Pass) Leonard et Suggs、玉米小斑病菌Bipolaris maydis (Nisikado et Miyake) Shoeml、金桔砂皮病菌Diaporthe citri (Fawcett) Wolf、甘蓝黑斑病菌Alternaria oleracea M.Ibrath、甘蔗凤梨病菌Ceratocystis paradoxa (Dode) Moreau、茶轮斑病菌Pestalotiopsis theae (Sawada) Steyaert、水稻胡麻叶斑病菌Cochliobolus miyabeanus (Ito et Kubibay) Drechsler et Dastur、辣椒炭疽病菌Colletotrichum capsici (syd.) Butl、贡柑链格孢菌Alternaria citri、烟草黑胫病菌Phytophthora parasitica var. Nicotianae (Breda de Hean) Tucker 10种植物病原真菌为供试菌,采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测定了茅苍术甲醇提取物的抑菌活性。通过有机溶剂萃取、硅胶柱层析、薄层层析等分离技术,并结合活性跟踪法对茅苍术抑菌活性成分进行分离纯化。利用核磁共振谱、质谱分析技术鉴定抑菌活性成分的结构。初步探究了活性物质的抑菌作用机理。采用菌丝生长速率法测定了茅苍术甲醇提取物对10种植物病原真菌菌丝生长的抑制活性。结果表明,质量浓度为10g/L时,茅苍术甲醇提取物对其中9种供试菌的抑制率均在70%以上,其中对玉米大斑病菌、金桔砂皮病菌和烟草黑胫病菌表现出很高的抑制活性,抑制率分别为91.01%、100%、100%。对玉米小斑病菌的抑制活性很低,抑制率仅为8.23%。进一步测定了茅苍术甲醇提取物对9种植物病原真菌的毒力。发现茅苍术甲醇提取物对9种植物病原真菌的毒力较高,EC50值为0.1316~2.7264g/L之间,对各种植物病原真菌菌丝的毒力相差较大,最大毒力(玉米大斑病菌)是最小毒力(贡柑链格孢菌)的20.72倍,对贡柑链格孢菌菌丝的毒力最低,EC5o为2.7264 g/L,对玉米大斑病菌菌丝的毒力最高,EC50值0.1316g/L。采用孢子萌发法测定了茅苍术甲醇提取物对10种植物病原真菌孢子萌发的抑制作用。结果表明,质量浓度为10g/L时,茅苍术甲醇提取物除了对玉米小斑病菌孢子萌发的抑制率只有7.92%外,对9种供试菌的抑制率均在70%以上,其中,对玉米大斑病菌、金桔砂皮病菌、甘蔗凤梨病菌、茶轮斑病菌、烟草黑胫病菌孢子的萌发有强烈的抑制作用,抑制率分别为95.24%、100%、95.36%、90.11%、100%。利用液-液萃取法将茅苍术甲醇提取物初步分成石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物。经活性测定,发现抑菌活性成分主要存在于乙酸乙酯和石油醚萃取物中。乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析和薄层层析分离纯化,并结合活性跟踪法,从中分离得到1个活性化合物。经核磁共振(NMR)和质谱(MS)解析,该活性化合物被鉴定为苍术烯内酯丙。采用菌丝生长速率法测定了苍术烯内酯丙对10种植物病原真菌菌丝生长的抑制作用。结果表明,质量浓度为0.1g/L时,苍术烯内酯丙对金桔砂皮病菌、甘蓝黑斑病菌、烟草黑胫病菌的抑制活性较高,抑制率分别为78.20%、70.75%、80.83%;对玉米小斑病菌、水稻胡麻叶斑病菌的抑菌活性较低,抑制率分别为33.41%、29.78%。进一步测定了苍术烯内酯丙对8种植物病原真菌的毒力。发现苍术烯内酯丙对金桔砂皮病菌、甘蔗凤梨病菌的ECso分别为0.0609 g/L、0.0551 g/L,与多菌灵毒力比较,苍术烯内酯丙对金桔砂皮病菌、甘蔗凤梨病菌的抑菌活性低于多菌灵。但苍术烯内酯丙对玉米大斑病菌、甘蓝黑斑病菌、茶轮斑病菌、辣椒炭疽病菌、贡柑链格孢菌、烟草黑胫病菌的ECso分别为0.0302 g/L、0.0410 g/L、0.0727 g/L、0.0845 g/L、0.0612 g/L、0.0434 g/L,抑菌活性明显高于多菌灵。初步探究了苍术烯内酯丙对烟草黑胫病菌的抑菌作用机理。结果表明,经苍术烯内酯丙处理后的烟草黑胫病菌,其部分菌丝体膨大、畸形、分支多、断裂;菌丝体细胞膜的通透性发生改变,造成菌丝体内含物外渗,菌丝体培养液的电导率增加;菌丝体的可溶性蛋白含量降低;果胶酶活性降低;超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性均下降,使菌体自身的解毒能力降低,最终导致菌体死亡。
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