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目的:在本实验室建立多对型特异性引物套式PCR对HBV进行基因分型的方法,并应用多对型特异性引物套式PCR法对昆明、洛阳两地献血者乙肝表面抗原(HBsAg)筛查阳性标本进行基因分型,了解昆明、洛阳两地献血者人群HBV基因型的分布情况;调查昆明、洛阳两地仅谷丙转氨酶(ALT)单项阳性及各项血液检验均阴性的合格血液样本中,乙肝表面抗原阴性、核酸检测阳性样本的比率,并对核酸检测阳性的样本进行序列分析。方法:1.参照文献根据HBV前sl基因和s基因区域内的保守序列设计出十条引物,其中两条外引物,8条内引物,并将8条内引物分为A、B两组,分别扩增对应于A、B、C和D、E、F型的HBV DNA片断。优化两轮PCR的扩增条件,将得到的第2轮PCR产物进行琼脂糖电泳,根据PCR产物片断大小判定其基因型。分型结果以s基因直接测序法加以验证。分别收集昆明、洛阳的献血者(HBsAg)检测阳性标本279份和88份,采用多对型特异性引物套式PCR的方法对血浆中的HBV进行基因分型。2.对昆明、洛阳两地仅ALT单项阳性血及合格血中HBV核酸检测阳性样本的病毒DNA大s区进行PCR扩增,对扩增产物进行测序及序列分析。结果:1.经条件优化建立了多对型特异性引物套式PCR法对HBV进行基因分型的扩增体系和扩增条件。经s基因测序法验证该分型方法准确可靠。2.洛阳88份标本中,用型特异性引物法成功分型72例,分型成功率81.8%。其中B型10例(13.9%);C型46例(63.9%);B、C混合型16例(22.2%)。昆明279份标本中成功分型214例,分型成功率76.7%。其中B型69例(32.2%);C型103例(48.1%);B、C混合型41例(19.2%);D型1例(0.5%)。3.在昆明、洛阳两地的合格血中,HBsAg阴性核酸检测阳性样本的检出率都为0:仅ALT单项阳性血中的HBsAg阴性核酸检测阳性样本检出率都为0.1%。4.两例表面抗原阴性核酸检测阳性标本均无任何血清学标志物,基因型分别为C和C/D重组型,S基因区存在核苷酸突变。结论:1.型特异性引物法能够准确的对HBV进行基因分型,方法简明,可靠。洛阳和昆明地区献血者中HBV携带者都以C型为主,并有一定比例的B型和B、C混合型,昆明地区发现一例D型,未见A、E、F基因型。2.我国献血者中有一定比例的隐性乙型肝炎感染者存在,并初步掌握了其血清学及分子生物学特点。