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目的:1.观察纳米CD133Ab(anti-body)-SPIO复合物联合放疗对人脑胶质瘤U251细胞株生长的影响,并评价两者的联合效应;2.观察纳米CD133Ab(anti-body)-SPIO复合物对人脑胶质瘤U251细胞体外磁共振成像的影响。
方法:1.制备纳米CD133Ab(anti-body)-SPIO复合物并使用H-600型TEM对其进行形态学观察;2.细胞免疫组化方法检测脑胶质瘤U251细胞中CD133分子的表达情况;3.流式细胞分选出人脑胶质瘤U251-CD133+细胞;4.WesternBlotting法检测U251细胞分选前后CD133的表达水平;5.将纳米CD133Ab(anti-body)-SPIO复合物、SPIO、CD133Ab(anti-body)分别与脑胶质瘤U251细胞及筛分后U251-CD133+细胞孵育,体外磁共振成像(MRI)观察各组T2弛豫时间;6.MTT法观察纳米CD133Ab(anti-body)-SPIO复合物和CD133Ab(anti-body)对人脑胶质瘤U251细胞及分选后U251-CD133+细胞毒作用;7.克隆形成抑制实验检测纳米CD133Ab(anti-body)-SPIO复合物和CD133Ab(anti-body)对脑胶质瘤U251细胞放射增敏的影响。
结果:1.透射电镜观察纳米CD133Ab(anti-body)-SPIO复合物近似圆形,电子密度高,呈散在分布或聚集成片;2.脑胶质瘤U251细胞中有CD133分子阳性表达;3.分选出CD133表达阳性的细胞;4.分选后细胞CD133分子表达水平比分选前的明显升高;5.体外磁共振成像(MRI)显示脑胶质瘤U251细胞及筛分后U251-CD133+细胞的复合物组T2弛豫时间低于其它三组(p<0.05);6.在0.0488μg/ml~25μg/ml范围内,复合物作用于脑胶质瘤U251及U251-CD133+细胞24h,细胞毒性呈明显剂量依赖性,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,50%细胞抑制率(IC50)为分别为11.84μg/mL和12.06μg/mL,在25μg/mL时肿瘤细胞增殖抑制率最高值分别为59.46%和56.66%;7.CD133Ab+照射组与单纯照射组(阴性对照组)比较,细胞存活分数差异有统计学意义(P<0.01),CD133Ab(anti-body)-SPIO复合物+照射组与CD133Ab+照射组比较,细胞存活分数差异亦有统计学意义(P<0.01),在照射4Gy以上随X射线剂量增加而增强。
结论:纳米CD133Ab(anti-body)-SPIO复合物对人脑胶质瘤细胞具有较好磁共振靶向成像作用;纳米CD133Ab(anti-body)-SPIO复合物对人脑胶质瘤有细胞毒作用和放射增敏作用。