【摘 要】
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为了研究调控青蒿腺毛发育的分子机理及转基因青蒿后代的遗传,以期获得更高青蒿素含量的转基因青蒿。本研究通过同源克隆及RACE从青蒿叶片cDNA文库中克隆了一个HD-ZIP IV家族
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为了研究调控青蒿腺毛发育的分子机理及转基因青蒿后代的遗传,以期获得更高青蒿素含量的转基因青蒿。本研究通过同源克隆及RACE从青蒿叶片cDNA文库中克隆了一个HD-ZIP IV家族的转录因子,根据其氨基酸序列与拟南芥GL2蛋白相似度较高的特征命名为AaGL2。利用生物信息学软件分析了其氨基酸序列的保守结构域信息及同其他物种中同源基因的进化关系,利用实时定量PCR检测了该基因的组织表达特异性及受甲基茉莉酸处理时转录水平变化,利用融合荧光蛋白及烟草瞬时表达系统研究了其蛋白的亚细胞定位,利用酵母杂交系统研究了其转录自激活活性,利用Southern杂交检测了其在青蒿基因组中的拷贝数。结果显示AaGL2在进化上和向日葵的HAHR1最为接近,其次和拟南芥GL2最相似;其在青蒿茎及10天龄的花蕾中表达量较高,并且对甲基茉莉酸处理十分敏感;其蛋白定位于细胞核,在酵母中没有转录自激活活性;在青蒿基因组中至少有两个拷贝。在转基因青蒿后代遗传分析方面,本研究以之前本实验室获得的共转CYP71AV1和CPR基因的青蒿(GYR)T0代植株为基础,对其T2代群体用PCR和Southern Blot分别检测了目标基因的分离比及部分植株中目标基因拷贝数;利用实时定量PCR分析了部分植株中目标基因的转录水平;利用HPLC-ELSD测定了其青蒿素含量;对其关键农艺性状(生物量)也进行了测定。结果表明,虽然目标基因在世代间可以遗传,但后代阳性苗比例低于理论值,目标基因的拷贝数也存在一些不规则的变化,表明转基因位点仍未纯合;转基因后代中目标基因的表达整体上高于非转基因对照。T2代青蒿中青蒿素含量变异幅度减小,转基因青蒿中青蒿素含量最高的比对照提高46.9%,植株鲜重和叶片干重与对照比则没有显著差异。综上本研究表明:AaGL2属于青蒿HD-ZIP IV家族的转录因子,其可能参与青蒿腺毛的发育调控,具体功能需进一步研究;外源基因在转基因青蒿世代间可以传递。本研究为青蒿腺毛发育调控机制的探索及转基因青蒿的实际应用打下了基础。
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