东北地区富含PUFAs茶藨子的筛选及相关基因的克隆和表达

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茶镳子(RibesL.)属于虎耳草科,又名醋栗,灯笼果。茶镳子的果实产品口感极佳,含有丰富的糖类、维生素Vc等营养成份,可加工成果酱、果汁,酿酒,具有很高的经济和药用价值。茶藨子的果实种子中的不饱和脂肪酸具有增强人体免疫力、降血脂、改善动脉硬化等作用。本研究以解析茶藨子中不饱和脂肪酸合成的分子调控网络及研究脂肪酸成分之间的最佳比例为目标,主要侧重于我国东北地区8个品种茶藨子中富含多不饱和脂肪酸品种的筛选,以及茶藨子中RmD6E、RmD8B、RmFAD3、RrAB13、RrNFYB以及RrNFYC2基因的功能关系、时空表达模式的分析,完善和发展茶藨子中不饱和脂肪酸合成网络的分子机理打下坚实的基础。获得结果如下:1.东北地区8种茶藨子不饱和脂肪酸的测定运用索氏提取法和气相色谱法对八个品种茶藨子中粗脂肪含量和脂肪酸含量进行测定。在这八个品种中红醋栗的粗脂肪的百分比最高,为21.19%。而黑风粗脂肪的百分比最低,只有13.94%。在8种茶藨子中红醋栗的脂肪酸和不饱和脂肪酸含量高于其他品种,而黑醋栗的两项含量均最低。2.茶藨子PUFAs相关基因的全长cDNA克隆运用RACE克隆技术,对茶藨子PUFA相关基因进行克隆,最终得到6个基因的序列,分别是全长为1766bp的RmD6E基因,登陆号:KX056120;全长为1666bp的RmD8B基因,登陆号:KX061751;全长为1539bp的RmFAD3基因,登陆号:KX061752;全长为2228bp的RrABI3基因,登陆号:KX061754;全长为961bp的PrNF-YB基因,登陆号:KX061753;全长为 1382bp 的RrNF-YC2基因,登陆号:KX061755。3.茶藨子PUFAs相关基因的系统进化分析运用各种生物学在线软件,对RmD6E、RmD8B、RmFAD3、RrABI3、RrNFYB以及RrNFYC2基因序列进行分析。预测6个基因的蛋白质的一、二级结构,以及进行系统进化分析。RmD6E、RmD8B基因与黑茶藨子的D6D、D8B基因亲缘关系较近,并且由于RmD6E、RmD8B基因参与脂肪酸的合成和调控,它们的进化分析显示其与含油类物种亲缘关系较近。RmFAD3蛋白与其他物种都不相似,自己单属一支。RrAB13蛋白在哺乳动物中与人类和黄牛亲缘关系较近,在植物中与番茄,马铃薯亲缘关系较近。RrNFYB、RrNFYC2蛋白均属于亲水蛋白。RrNFYB基因与拟南芥,截形苜蓿亲缘关系较近,而RrNFYC2基因与胡杨亲缘关系较近。4.茶藨子PUFAs相关基因的表达分析运用实时定量技术分析 RmD6E、RmD8B、RmFAD3、RrABI3、RrNFYB以及 R&NFYC2基因在8个茶藨子品种的4个阶段表达水平的变化:RmD6E、RmD8B、RmABI3三个基因的表达量与果实大小成正比,而RmFAD3基因的表达量与果实大小呈反比。RrNFYB和RrNFYC2基因的表达水平规律不明显,在很多品种中表达量相差不多。
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