三种潜根线虫种间及种内群体的形态学及分子鉴定研究

来源 :浙江大学农业与生物技术学院 浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:XUCHUNLIAN
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潜根线虫(Hirschmanniella spp.)是一类重要的迁移性内寄生植物病原线虫,在世界各大稻产区广泛分布。本研究对7个不同地理群体水稻上的潜根线虫作了较详细的形态学、分子生物学两方面的鉴定分析。根据传统的形态学鉴定方法,共鉴定出三个种:水稻潜根线虫H.oryzae、尖突潜根线虫H.mucronata和细潜根线虫H.gracilis。不同地理群体的水稻潜根线虫和尖突潜根线虫除个别测量值外其他各项均在模式标本的参考范围内,而细潜根线虫各项测量值要比模式标本的相对偏小。在分子生物学鉴定方面,本研究在利用PCR-RFLP方法对潜根线虫种群进行分类和鉴定方面做了初步尝试,建立了针对三种潜根线虫相对较稳定的分子鉴定方法和系统。鉴于潜根线虫混合虫口问题和种间差异不显著等特点,作者摸索出单条线虫PCR的成熟条件。对全部七个地理群体的22条潜根线虫样品ITS区进行了PCR扩增,结合Genbank上的潜根线虫序列做出了系统发育树。同时,用AluⅠ,DdeⅠ,EcoRⅠ,HaeⅢ,Hin6Ⅰ,HinfⅠ,PstⅠ等7种限制性内切酶对扩增产物进行了RFLP分析。结果表明:不同地理种群的潜根线虫ITS区扩增片段长度均在750bp左右。酶切图谱种间差异较大,但也存在种内群体的变异。通过具体分析,筛选出两种限制性内切酶(EcoRⅠ,PstⅠ)。他们组成的酶切图谱在种间差异显著、种内酶切效果稳定,可以有效地用于本研究中三种潜根线虫的分子鉴别与鉴定。
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