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目的越来越多的研究证明活性氧与高血压、糖尿病、白内障等疾病有密切的关系,大量的研究也发现一定抗氧化物质的使用可以减轻疾病症状或者有潜在的积极作用,本研究旨在研究三七醇提物与碱性电解水对实验性氧化损伤的保护作用。方法1.建立体外氧化损伤模型研究不同浓度三七醇提物和碱性电解水自由基生成的抑制作用。采用不同的微粒体脂质过氧化损伤模型和化学发光模型,加入三七醇提物与碱性电解水干预后检测反应体系中脂质过氧产物的量,评价三七醇提物和碱性电解水体外清除自由基作用的剂量-效应关系。2.细胞氧化应激模型的建立分别以QZG细胞(人肝组织细胞系)和HepG2细胞(人肝肿瘤细胞系)作为研究载体,使用不同pH的电解水配置培养基培养细胞,分为阴性对照组、阳性对照和不同pH碱性电解水组,利用叔丁基过氧化氢(tBHP)造成细胞氧化应激损伤,研究碱性电解水对细胞氧化应激损伤的保护作用。3.建立大鼠照射氧化应激损伤模型、D-半乳糖和乙醇氧化应激损伤模型研究三七醇提物或碱性电解水对实验动物的抗氧化作用。(1)照射氧化应激动物模型的建立:40只SD大鼠共分成5组,分别是阴性对照组(NC)、阳性对照组(PC)、三七醇提物低(50mg/kg·d,L)、中(225mg/kg·d,M)和高(450mg/kg·d,H)剂量组,每组8只。除阴性对照组外实验动物全部给予60Co-γ射线累计6Gy、共计照射2次的照射剂量,照射前3天和照射后7天给予三七醇提物灌胃,阳性对照组和阴性对照组灌胃相同剂量的生理盐水。(2)D-半乳糖氧化应激模型的建立:32只大鼠共分成4组,分别是自来水组(W)、电解水组(ERW)、D-半乳糖组(W-D)、D-半乳糖电解水组(ERW-D),每组8只。自来水组饮用常规水,电解水组饮用pH为8.4的电解水2个月,模型组腹腔注射D-半乳糖100mg/kg.d,对照组注射相同剂量的生理盐水,总共4个月。(3)酒精氧化应激模型的建立:32只大鼠共分成4组,分别是自来水组(W)、酒精组(W-乙)、酒精电解水组(ERW-乙)、电解水组(ERW),每组8只。自来水组饮用常规水,电解水组饮用pH为8.4的电解水4个月,模型组给予50%酒精(0.76ml/100g·d)灌胃3天,对照组给予相同剂量的生理盐水。处理结束后大鼠禁食12h,2%戊巴比妥钠麻醉取血清和肝脏,检测相应的氧化应激指标和抗氧化指标,以及相关分子的蛋白表达。结果1.三七醇提物抗氧化作用研究化学发光的实验结果显示,三七醇提物对化学发光反应存在明显的剂量依赖性抑制作用,证明三七醇提物可直接清除OH自由基。CC14/NADP、CHP和Vc/Fe2+LPO模型的实验结果显示,不同浓度的三七醇提物均能显著地抑制MDA的生成,且存在一定的剂量-效应关系。动物实验结果显示60Co-γ照射后,肝组织和血清中CAT活性升高(P<0.05), SOD活性、GSH含量均降低(P<0.05),肝组织中GSSG、MDA含量增加(P<0.05),MDA血清中变化不明显,给予不同剂量三七醇提物后肝组织和血清中CAT、SOD活性和GSH含量均有不同程度的升高(P<0.05);肝组织MDA和GSSG含量呈下降趋势;血清中MDA含量下降,且以高剂量组降低最明显(P<0.05)。2.碱性电解水抗氧化作用研究体外模型实验发现,在代表不同自由基反映的微粒体LPO模型中,电解水pH值不同,对自由基反应的作用不同,相同pH值的电解水对不同自由基激发模型其作用也不尽相同。细胞实验结果显示,给予tBHP刺激后,QZG细胞中CAT、Nrf2、PRX1分子表达变化不明显,T-SOD和HO-1蛋白表达降低(P<0.05);HepG2细胞中CAT、GR、GCS、PRX3、HO-1表达增加(P<0.05);给予不同pH电解水培养后的细胞,这些抗氧化分子的表达均增加,以pH为8.4组增加的种类和数量为最多,其他pH电解水增加较少或者变化不明显。动物实验结果发现,单纯给予D-半乳糖刺激后,大鼠血清和肝组织中MDA含量增加(P<0.05),血清中CAT、Gpx、GST的活性和T-AOC增高(P<0.05),SOD变化不明显;肝组织中Gpx活性降低(P<0.05),其它分子活性变化不明显。经过两个月自由饮用电解水后的大鼠血清中MDA含量较阳性对照无明显改变,肝组织降低(P<0.05);饮用电解水后的大鼠给予D-半乳糖刺激后,血清和肝脏中的MDA含量均增加(P<0.05)。单纯给予电解水血清中CAT、Gpx活性增高(P<0.05),给予电解水的实验大鼠刺激后,血清中SOD活性升高(P<0.05),其他血清和肝组织中抗氧化能力与阳性对照组相比降低或者无变化。酒精刺激后,大鼠血清中MDA含量明显高于对照组(P<0.05),同时引起T-AOC和CAT、GST、Gpx等抗氧化酶活性应激升高(P<0.05);肝组织中MDA升高(P<0.05),但无统计学意义,SOD和Gpx活性较阴性对照组降低(P<0.05),其它抗氧化能力变化不明显。给予电解水后,血清中MDA含量较阴性对照高,肝组织较阴性对照组低,饮用电解水大鼠给予酒精刺激后,肝组织中MDA含量升高(P<0.05),血清中T-AOC、Gpx也高于阴性对照组,肝组织中则降低(P<0.05)。结论1.三七醇提物有一定的清除自由基,抑制脂质过氧化产物的生成等抗氧化作用,且抗氧化作用在一定剂量范围内呈剂量-效应关系。2.不同pH碱性电解水抗氧化保护作用不同,弱碱性的作用较强,偏大或者偏小都有促进脂质过氧化作用。3.饮用碱性电解水能提高机体的抗氧化能力,并可以保护过量饮酒造成的急性损伤,有保护D-半乳糖造成的氧化损伤等作用。