目的:糖尿病难治性伤口是糖尿病的常见并发症,在临床具有较高的患病率和致残率。因此,迫切需要我们找到应对糖尿病难治性伤口的治疗与护理措施,这对加强糖尿病足防治工作有重要意义。糖尿病难治性伤口及溃疡的发生机制与炎症的持续存在密切相关。姜黄素具备较强的抗炎抗氧化作用,已被证实可以改善糖尿病伤口的愈合,然而其较低的溶解性和生物利用度低限制了其临床方面的应用。新型姜黄素同源物C66弥补了天然姜黄素的这一缺点,其生物利用率大幅度提高,具有良好的临床应用前景。因此本课题通过将C66局部作用于伤口部位,评价其促糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的活性,并探讨其中的作用机制,旨在为临床开发、应用促糖尿病伤口的愈合制剂提供新的思路和解决办法。方法:1.本实验首先采用链尿佐菌素(STZ)建立起糖尿病小鼠模型。按照50mg/kg体重的标准连续五天腹腔注射STZ诱导I型糖尿病小鼠模型的形成,观察小鼠的大体情况(包括毛发、活动等),同时采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠的再上皮化、全层皮肤厚度变化情况,通过免疫组化法观察计算得出小鼠皮肤中血管生成因子CD31、细胞增殖因子Ki67的表达情况。2.在确保糖尿病小鼠成模并且血糖稳定的情况下,采用打孔器对小鼠背部皮肤进行切割,设计正常对照组、溶剂对照组、C66高浓度组、C66低浓度组、姜黄素组,通过局部给药法来对比观察姜黄素及高浓度和低浓度的姜黄素同源物C66对伤口愈合的影响,并对伤口愈合情况进行拍照记录;留取伤口给药后第十天各组小鼠伤口部位组织,从组织病理学角度分析C66对糖尿病小鼠伤口愈合的影响。3.采用q-PCR检测伤口组织炎症因子相关基因和mi R-146a含量,通过免疫印迹检测皮肤组织中白介素1受体相关激酶1(IRAK1),NF-κB以及NF-κB磷酸化蛋白的表达;进一步探究C66对伤口部位炎症及微小RNA的影响。4.最后通过体外培养人脐静脉细胞,并通过转染miR-146抑制剂、采用免疫印迹试验观察C66对NF-κB信号通路的影响,并探讨局部应用C66对糖尿病伤口的促愈合机制。结果:1.自注射链脲佐菌素第三天起80%的糖尿病组小鼠血糖稳定在16.7 mmol/L以上。倒置显微镜观察两组小鼠皮肤组织,与正常组小鼠比较,糖尿病组小鼠表现为表皮变薄、炎症细胞增多等病理改变(P<0.05),提示细胞增殖活性减弱、伤口部位炎性加重。2.自伤口造模后第3天起,C66高浓度组、C66低浓度组的伤口愈合率相对于溶剂对照组和姜黄素组更具优势(P<0.05)。伤口形成后第14天,C66高浓度组,C66低浓度组伤口愈合率分别为98.48±2.75%、87.98±3.70%,两组比较无显著差异,但均明显高于溶剂对照组和姜黄素组。除此之外,伤后第14天的皮肤组织病理学观察结果显示C66高浓度组、C66低浓度组较溶剂对照组明显促进了皮肤再上皮化(P<0.05)、表皮厚度较正常组无显著差异。3.与溶剂对照组比较,C66高浓度组、C66低浓度组可增加糖尿病小鼠伤口中的microRNA-146a(miR-146a)表达水平,下调IRAK1和NF-κB磷酸化蛋白(p-p65)的表达(P<0.05)。此外,C66高浓度组、C66高浓度组可下调炎症因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-8(IL-8)和白介素6(IL-6)mRNA的表达(P<0.05)。4.在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中获得的体外数据显示,由于miR-146a表达上调,C66可以逆转高葡萄糖(HG)诱导的NF-κB活化,这与体内实验结果发现相符,miR-146a抑制剂的使用则完全阻断了C66对miR-146a的上调作用。结论:1.C66可促进糖尿病小鼠皮肤伤口的愈合,愈合效果优于姜黄素且呈剂量依赖型改善。2.C66通过上调mi R-146a来抑制NF-κB介导的炎症途径,使炎性细胞因子IL-8、IL-6和TNF-α的产生减少,减轻伤口部分的炎症,最终促进伤口的愈合。