血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒的分离鉴定及其卵黄抗体的研制与应用

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yibola2008
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禽类心包积水综合征(Hydropericardium syndrome,HPS)又称安卡拉病(Angara disease,AD),是由血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒(Fowl Adenovirus serotype 4,FadV-4)引起禽类以心包积液为主要特征的一种高度接触性、致病性传染病。2014年以来,该病从我国山东、江苏、广东等沿海地区逐步向河北、河南、山西、安徽、湖北等内陆省份陆续扩散,给我国养禽业造成了巨大的经济损失。本研究对山东某鸡场临床诊断为疑似FadV-4感染的病死鸡进行了病毒分离与鉴定试验,获得了FadV-4分离毒株,并利用该分离毒株制备了油乳剂灭活疫苗及高免卵黄抗体,并进行临床实验效果评估。获得了以下结果:(1)针对送检临床疑似病料,采用FadV-Ⅰ特异性引物进行PCR检测,结果为阳性,确诊为安卡拉病病毒。(2)将临床病料接种SPF鸡胚进行动物回归试验,可引起鸡胚规律性死亡以及心包积液等典型病变,ELD50为10-6.78/0.1 mL。取上清,经血凝性检测分离株病毒对鸡红细胞无凝集性。采用Hexon基因的特异性引物进行分离株病毒基因测序,结果与GenBank中登录的23株血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒的Hexon基因序列同源性在98.7%99.8%之间。分离株病毒接种SPF鸡后可使鸡表现出FadV-4感染的典型临床症状和病理变化。(3)以该FadV-4分离株(SD株)制备了油乳剂灭活疫苗。抗体消长规律试验显示0.2 mL和0.5 mL剂量免疫SPF鸡后,抗体水平均呈现一个迅速上升,随后开始缓慢下降并维持一定水平的过程。免疫攻毒保护试验显示0.2 mL剂量组在免疫后21 d产生抗体效价可达4.40 log2,且能完全保护FadV-4强毒株的攻击,保护率达100%。(4)以FadV-4(SD株)油乳剂灭活疫苗多次免疫蛋鸡制备了FadV-4(SD株)卵黄抗体。琼脂扩散试验表明该抗体效价(log2)为6 log2,对SPF鸡具有良好的安全性以及预防保护效果;临床应用试验表明该卵黄抗体对肉仔鸡感染FadV-4的预防保护率高达98.67%,对肉仔鸡感染FadV-4的治愈率高达97.33%。综上所述,本研究获得了一株FadV-4分离株,并完成了其Hexon基因序列分析,为丰富FadV-4的分子流行病学提供了资料;为研究FadV-4致病机理和发病机制等基础性研究奠定了基础。以分离毒株制备的FadV-4(SD株)油乳剂灭活疫苗具有良好的安全性和免疫原性。以FadV-4(SD株)油乳剂灭活疫苗制备的卵黄抗体对临床中FadV-4的感染具有良好的预防和治疗效果,可用于鸡安卡拉病的预防和治疗,为我国鸡安卡拉病的综合防控提供了技术手段。
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