【摘 要】
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牛病毒性腹泻/粘膜病（Bovine viral diarrhoea/Mucosal disease,BVD/MD）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhoea virus,BVDV）感染引起的牛、羊和猪等动物的一种接触性传染病。牛感染BVDV后,其生产性能下降、引起生殖障碍、并且持续性感染导致免疫抑制,对我国奶牛养殖业,乃至世界范围内的奶牛产业、肉牛产业均造成了巨大损失。本文
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牛病毒性腹泻/粘膜病（Bovine viral diarrhoea/Mucosal disease,BVD/MD）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhoea virus,BVDV）感染引起的牛、羊和猪等动物的一种接触性传染病。牛感染BVDV后,其生产性能下降、引起生殖障碍、并且持续性感染导致免疫抑制,对我国奶牛养殖业,乃至世界范围内的奶牛产业、肉牛产业均造成了巨大损失。本文从基因库（Gene Bank）中查找牛病毒性腹泻病毒E2基因的序列（KF048847.1）,作为目的基因合成并插入pcDNA3.1（+）-EGFP载体质粒的Nhe I和Bam HI酶切位点之间,构建pcDNA3.1（+）-BVDV E2-EGFP重组质粒。并将重组质粒转染入人胚肾细胞（293FT）,于转染后48h,用荧光显微镜观察,可见转染的少数293FT细胞发出绿色荧光,BVDV E2基因成功在真核细胞内表达。对BVDV E2目的基因序列进行优化,增加牛β-actin（NM173979.3）5’UTR和3’UTR。优化后的BVDV E2基因与m Cherry相连接,共同组成BVDV E2-m Cherry。插入topo载体,构建topo-BVDV E2-m Cherry重组质粒。重组质粒经Afl II单酶切制备线性化的DNA模板,体外转录成mRNA并在5’端加帽、3’端加尾和修饰核苷酸,增强mRNA稳定性,提高翻译效率以及降低免疫原性。通过包裹脂质体纳米粒子（LNP-Man）,起到递送mRNA的作用,并且保护mRNA不在细胞外降解。本文制备一种BVDV E2基因的mRNA疫苗,为下一步疫苗的功能检测与防控积累了数据。
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