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目的鼻咽癌中CD8+肿瘤浸润性淋巴细胞(Tumor infiltrating lymphocytes,TILs)的浸润与患者的预后呈正相关,而环氧化物酶-2(Cyclooxygenase 2,COX-2)则正相反,其表达上调,且与患者的不良预后相关。近年来,研究发现COX-2不仅与肿瘤的发生发展密切相关,而且还参与抑制性免疫微环境的形成,从而介导免疫逃逸。目前在其他实体瘤中的研究发现COX-2与CD8+TILs浸润呈显著负相关,那么,鼻咽癌中COX-2与CD8+TILs浸润之间是否存在联系呢?目前尚无相关报道。本研究将探索鼻咽癌中COX-2的表达与CD8+TILs浸润的相关性并进行机制初步探讨。材料和方法本研究利用Oncomine鼻咽癌数据集分析在鼻咽癌和正常鼻咽粘膜组织中COX-2的表达;利用TIMER软件分析TCGA数据库中头颈部鳞癌中COX-2的表达,以及COX-2与免疫细胞浸润的相关性。采用免疫组织化学染色(Immunohistochemistry,IHC)的方法,回顾性分析236例于2011年1月至2011年12月在我院经病理确诊、接受根治性调强放射治疗、初诊无远处转移的鼻咽癌患者肿瘤组织标本中COX-2的表达及CD8+TILs浸润密度;分析鼻咽癌组织中COX-2表达与CD8+TILs浸润密度的相关性;采用Kaplan-Meier分析和COX多因素分析COX-2表达和CD8+TILs浸润的预后价值。研究还选用鼻咽癌细胞株C666-1(COX-2高表达)及CNE-2(COX-2低表达),利用慢病毒感染或RNA干扰,分别构建COX-2的敲减/干扰及过表达细胞株。采用趋化因子芯片检测细胞培养上清中趋化因子的表达变化,并用q PCR和ELISA验证相关差异因子在转录水平和蛋白水平的表达差异。RNA-seq发现差异信号通路,并用q PCR验证通路中相关分子的表达变化。结果Oncomine的鼻咽癌数据显示鼻咽癌组织中COX-2表达高于正常对照组织(P<0.001);TIMER软件分析发现TCGA头颈部鳞癌中COX-2表达显著高于相应的正常头颈组织(P<0.001),并且COX-2表达与CD8+TILs数目呈负相关(r=-0.139,P=0.0024)。IHC结果显示在鼻咽癌组织COX-2表达上调,且与CD8+TILs的浸润密度呈负相关(r=-0.233,P=0.003)。Kaplan-Meier分析发现高表达COX-2患者的总生存(Overall survival,OS)(73.9%vs.82.9%,P=0.12)和无转移生存(Distant metastasis-free Survival,DMFS)(73.8%vs.86.9%,P=0.014)均劣于COX-2低表达患者,而无复发生存(Relapse-free survival,RFS)(89.0%vs.91.9%,P=0.49)则几乎无差别。Kaplan-Meier分析则显示高CD8+TILs浸润密度患者的OS(84.4%vs.72.1%,P=0.028))、DMFS(87.6%vs.74.1%,P=0.025)和RFS(96.3%vs.84.3%,P=0.0031)均优于低CD8+TILs浸润密度患者。COX多因素分析显示COX-2表达(HR=2.041,95%CI:1.073-3.883,P=0.03)和CD8+TILs(HR=0.518,95%CI:0.271-0.992,P=0.047)均是鼻咽癌患者DMFS的独立预后因素;CD8+TILs(HR=0.222,95%CI:0.074-0.884,P=0.007)是鼻咽癌患者RFS的独立预后因素。因子芯片发现在过表达COX-2的CNE-2与敲减COX-2的C666-1的培养上清中,CXCL9/10的表达量均下调;ELISA检测也发现CXCL9/10在过表达或敲减/干扰COX-2鼻咽癌细胞株的培养上清中下调,q PCR的结果与ELISA一致。对COX-2的表达进行正反调节的CNE-2与C666-1的CXCL9/10的表达改变不一致,其中下调C666-1的COX-2表达后出现CXCL9/10变化与预期相反的结果。RNA-seq显示干扰C666-1的COX-2表达,CXCL10表达下调最为显著,GO分析显示I型干扰素信号通路及对I型干扰素的细胞反应的相关通路均下调;q PCR证实干扰素的表达发生改变,促进CXCL9/10分泌的IFNα1/α2均出现下调。结论鼻咽癌组织中COX-2的表达升高与CD8+TILs浸润呈负相关,二者均为鼻咽癌DMFS的独立预后因素,而CD8+TILs同时还是RFS的独立预后因素。在EBV阴性的CNE-2细胞中过表达COX-2抑制CXCL9/10的分泌,然而在EBV阳性的C666-1细胞中COX-2可能因影响自身I型干扰素通路的改变,进而促进CXCL9/10的分泌。