ABO和Rh血型鉴定是日常献、输血的必检项目，临床常用血型检测方法主要有平板法、试管法、微孔板法、微柱凝胶法和全自动血液分析仪等，这些方法都是基于红细胞的凝集反应，会受溶血等因素的影响，且检测通量较低。也有研究利用基因芯片进行血型判定，一定程度上可以规避血清学方法的弊端，但是操作繁琐、耗时，并且需要依赖于昂贵的仪器。本研究将免疫磁珠与蛋白质芯片技术相结合，根据抗原抗体反应原理进行血型判定，并引入补体C1q作为共同示踪物，实现抗原、抗体的同步检测，为进一步构建高通量、自动化、方便快捷的血型鉴定方法打好基础。目的：构建一种以磁珠为标记物的，用于ABO正反定型和Rh（D）血型鉴定的蛋白质微阵列方法。方法：1.将蛋白质偶联磁珠点样于醛基、高分子三维基片D和氧化型琼脂糖基片表面，过夜固定后洗去未连接的探针，取各基片样点信号值进行分析，比较蛋白质在三种基片表面的固定效率。将抗体固定于三种基片表面，再加入相应二抗偶联磁珠与之反应，检测反应后的信号值，比较三种基片表面固定蛋白质的反应活性。根据比较的结果选择出适合本实验的基片。分别在不同的琼脂糖浓度、点样浓度、固定时间、固定温度、洗涤方式等条件下构建蛋白质芯片，比较反应后的信号值，得出优化的实验条件用于后续实验。2.根据优选出的条件，构建ABO/Rh血型正反定型蛋白质芯片。取标准抗A、抗B单克隆抗体和多人份混合A型、B型、O型Rh（D）红细胞，分别用标本稀释液作等倍稀释，用血型芯片进行检测，分析该方法的检测灵敏度，并与试管法进行比较。用血型芯片对同一标本进行4次重复检测，比较检测结果的组内和组间差异。最后，用构建的血型芯片对30例临床健康献血者的血液标本进行检测，与试管法检测结果对比，分析该血型芯片的准确性与特异性。结果：1.通过三种基片表面蛋白质固定率的比较，发现氧化型琼脂糖基片固定效率最高（P<0.05）。比较反应后各基片表面的信号值发现，醛基基片上固定的蛋白质几乎没有活性，且信号背景较高；氧化型琼脂糖基片上固定的蛋白质反应性最好，高分子三维基片D次之，并且氧化型琼脂糖基片上样点更均一，因此选择氧化型琼脂糖基片作为后续实验的基片。经过比较获得优化的实验条件：以1%的琼脂糖溶液制作基片，用30%的甘油-PBS将蛋白质稀释到100μg/ml进行点样，在24℃固定8h，再用1mg/ml的BSA封闭，芯片构建好后置于4℃冰箱保存，反应的最后一步用0.05%的PBST倒置摇洗，再用去离子水洗涤。2.用构建的血型芯片检测倍比稀释的血液标本，结果显示该芯片法用于血型的检测，正定型效价可达1：8192，反定型效价可达到1：4096，而试管法对于同一标本的检测正定型效价为1：256，反定型效价为1：16。对重复性检测的每张芯片内和各芯片间平行点的变异系数进行分析，组内和组间变异系数在14%~22%之间。对于临床标本的检测，芯片法和试管法的结果判定都一致：A型7例，B型6例，O型12例，AB型5例，而Rh(D)血型测定结果有阴性3例，其余全为阳性。芯片法检测结果样点较清晰，无交叉反应。结论：1.氧化型琼脂糖基片表面蛋白质固定率和生物活性更高，制作蛋白质芯片效果优于醛基基片和高分子三维基片D；2.成功构建了基于磁珠的ABO/Rh(D)血型检测蛋白质芯片，灵敏度、特异性和重复性均与试管法具有可比性。