论文部分内容阅读
鸡球虫病（Coccidiosis）是由艾美耳球虫（Eimeria）引起的一种严重危害养禽业发展的胞内寄生原虫病，主要引起宿主细胞免疫反应。白细胞介素-2（IL-2）是主要的调节机体细胞免疫的淋巴因子。IL-2通过与其受体（IL-2R）结合发挥调节免疫细胞的作用，所以IL-2R基因的诱导表达是淋巴细胞克隆扩增的基础和关键。研究发现IL-2的产生与T细胞的增值和抗球虫效应密切相关。球虫感染对IL-2R表达的影响尚无报道。本论文研究了柔嫩艾美耳球虫感染过程中鸡中枢与外周免疫器官中白细胞介素2受体α亚基（chIL-2Rα）分子表达的变化，旨在揭示球虫感染对雏鸡IL-2R表达的影响。以脾淋巴细胞总RNA为模板，通过RT-PCR方法克隆了鸡白细胞介素-2受体α亚基（chIL-2Rα）编码区基因。序列分析发现，鸡IL-2Rα编码区基因与GenBank上已发表序列的核苷酸同源性为99.2％，氨基酸同源性为99.5％。ChIL-2Rα与其它哺乳动物IL-2Rα在核苷酸和氨基酸水平上的同源性分别为29.6％-54.5％和18.8％-28.0％。鸡IL-2Rα成熟多肽链由胞外区（164aa）、穿膜区（22aa）和胞浆区（4aa）三部分组成，其N端4～21区域氨基酸和C端194～212区域氨基酸疏水性强，中间22～193区域氨基酸高度亲水；将chIL-2Rα胞外段基因克隆到pET-32a（+）中获得重组质粒pET32a-exchIL-2Rα，转化宿主菌E．coil RossetaTM（DE3）后用IPTG诱导表达的融合蛋白约34ku。为了检测鸡IL-2Rα亚基（chIL-2Rα）在球虫感染中的变化。采取柔嫩艾美耳球虫感染后第一、三、五、七天的三周龄鸡外周血、脾脏、盲肠扁桃体和法氏囊无菌分离淋巴细胞。细胞分成两份，一份加培养液和ConA刺激剂体外培养，另一份不加ConA培养。收集培养的细胞提RNA。用RT-PCR方法，以β-actin为内参照，定量分析淋巴细胞中IL-2Rα的mRNA丰度。结果表明，未经ConA刺激的实验组，和对照组相比，外周血、脾脏和盲肠扁桃体淋巴细胞IL-2RαmRNA表达量感染后第五天显著升高（P＜0.05），第七天达到高峰。法氏囊中IL-2Rα第五天显著升高（P＜0.05）。经过ConA刺激的实验组，和对照组相比，感染柔嫩艾美耳球虫后第一天，脾脏和盲肠扁桃体淋巴细胞中IL-2RαmRNA的相对浓度显著降低（P＜0.05）。随后外周血和脾脏淋巴细胞中IL-2RαmRNA相对丰度在第三天和第七天均显著升高（P＜0.05），第七天达到高峰。盲肠扁桃体中的表达量第七天显著升高（P＜0.05）。而法氏囊中的变化是第五天显著高于对照组，随后又下降直到第七天显著低于对照组（P＜0.05）。