基于色谱—质谱技术研究青钱柳叶化学成分

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青钱柳为胡桃科青钱柳属植物,民间主要用于清热消肿、止痛,属于我国特有的珍稀树种。近年来,青钱柳的研究由大部分集中于小分子物质分离鉴定及生物活性方面,开始逐渐转向分子量较大或成分较复杂的组分如多糖、皂苷、生物碱等方面。本文分别采用SPME-GC-MS和UPLC-QTOF-MS/MS对青钱柳叶中挥发性成分及酚酸提取物中组分进行定性分析,并采用LC-QqQ-MS测定其中主要的酚酸含量。此外,采用不同极性溶剂对青钱柳叶进行提取,并测定其总酚、总黄酮、总糖含量及抗氧化活性,最后采用UPLC-QTOF-MS/MS对抗氧化活性成分进行分析鉴定。主要研究结果如下:第1章:介绍了近年来国内外有关文献报道青钱柳化学成分、分离分析方法及生物活性方面的研究进展。简要概述了青钱柳的化学成分提取技术及分析方法现状,并阐述了液相色谱-质谱联用技术在植物化学成分分析中的优势。第2章:采用固相微萃取(SPME)和气相色谱-三重串联四极杆质谱联用仪(GC-QQQ-MS)相结合的方法对两个产地(江西修水野生和浙江文成人工栽培)的青钱柳叶挥发性成分进行研究,并比较了它们在挥发性化学成分种类及含量上的差异。结果表明:在两个产地的青钱柳叶中共鉴定出91种挥发性组分,共有44种挥发性组分,且主要是碳氢化合物类、醇类、醛类、酯类、酮类、萘类和醚类化合物,但两个样品在挥发性成分的具体组成和含量上存在一定的差异。野生青钱柳叶的挥发性成分主要是β-瑟林烯(18.52%)、石竹烯(8.11%)、β-甜没药烯(6.01%)、β-榄香烯(5.36%)、顺-香叶基丙酮(4.02%)等,人工栽培青钱柳叶的挥发性成分主要是β-波旁烯(11.05%)、β-瑟林烯(10.91%)、石竹烯(7.03%)、苯甲醇(7.01%)、2,6,11-三甲基十二烷(5.16%)、2,6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯基)-双环[3.1.1]庚-2-烯(5.36%)等。第3章:采用UPLC-QTOF-MS/MS定性分析青钱柳叶酚酸提取物中化学成分,并采用LC-QqQ-MS测定其中六种酚酸的含量,即没食子酸、原儿茶酸、对羟基苯甲酸、咖啡酸、对香豆酸和阿魏酸。结果显示:可溶性酚酸提取物中共初步鉴定出了22种化学成分,包括3种有机酸、9种酚酸、4种黄酮、3种酯类和3种其他类化合物,束缚性酚酸提取物中总共鉴定出26种化合物,包括8种有机酸、8种酚酸、4种黄酮和6种其他化合物;青钱柳叶中主要以羟基肉桂酸型酚酸含量较高,羟基苯甲酸型酚酸含量较少,且可溶性酚酸含量要大于束缚酚酸的含量,其中咖啡酸的含量最高,分别为583.61μg/mg和195.52μg/mg。第4章:利用比色法测定青钱柳叶不同溶剂(水、70%乙醇、乙酸乙酯和正己烷)提取物中总酚、总黄酮、总糖含量及抗氧化活性(DPPH自由基清除能力、还原能力、总抗氧化能力、Fe2+鳌合能力),考察酚类物质含量与抗氧化活性的相关性,并采用UPLC-QTOF-MS/MS分析提取物中主要活性成分。结果表明:不同提取物中总酚、总黄酮、总糖含量及抗氧化活性之间存在显著性差异且70%乙醇提取物表现出最高的总酚(219.01 mg GAE/g)、总黄酮含量(7.23 mg CE/g)及最强的DPPH自由基清除能力(35.46 mg TE/g)和还原能力(1.89 mmol FeSO4/g);总酚、总黄酮含量与DPPH自由基清除能力、还原能力之间呈显著正相关,与总抗氧化能力呈显著负相关,表明多酚类物质是青钱柳中主要的抗氧化剂。UPLC-QTOF-MS/MS分析70%乙醇提取物并初步鉴定出22种化合物,包括8种三萜皂苷类、5种黄酮、4种酚酸、3种酯类和2种有机酸,其中酚酸和黄酮类化合物是主要的抗氧化活性成分,有机酸、三萜皂苷及酯类化合物可能是潜在的抗氧化活性成分。
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