【摘 要】
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目的:探究中脑腹侧被盖区（VTA）多巴胺转运蛋白（DAT）在丙泊酚全身麻醉大鼠苏醒中的作用。方法:雄性SD大鼠,体质量250-300g。为观察VTA在丙泊酚麻醉中的作用,将20只大鼠随机分为2组:对照组（Negative control,NC）、6-OHDA毁损组（6-OHDA）,每组10只。为观察丙泊酚麻醉对VTA内DAT的影响,将20只大鼠随机分为2组:生理盐水组（Saline,S）、丙泊酚麻
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目的:探究中脑腹侧被盖区（VTA）多巴胺转运蛋白（DAT）在丙泊酚全身麻醉大鼠苏醒中的作用。方法:雄性SD大鼠,体质量250-300g。为观察VTA在丙泊酚麻醉中的作用,将20只大鼠随机分为2组:对照组（Negative control,NC）、6-OHDA毁损组（6-OHDA）,每组10只。为观察丙泊酚麻醉对VTA内DAT的影响,将20只大鼠随机分为2组:生理盐水组（Saline,S）、丙泊酚麻醉组（Propofol,P）,每组10只。其余实验部分将90只大鼠随机分为3组:对照组（Negative control,NC）、AAV空载组（AAV-NC）、AAV2-DAT-RNAi组（DAT-RNAi）,每组30只。为观察丙泊酚对前额叶皮层（PFC）c-fos蛋白表达的影响,免疫荧光及Western blot实验部分另添加生理盐水注射组（Saline,S）和丙泊酚麻醉组（Propofol,P）两个亚分组,每组10只。其中,NC组为正常大鼠;AAV-NC组和DAT-RNAi组经脑立体定位仪分别在双侧VTA注射基因敲低DAT的腺相关病毒（GV480）和阴性对照病毒（CON304）,总量为3ul,注射10min。P组经尾静脉以70mg/kg的剂量缓慢推注丙泊酚至大鼠翻正反射消失（Loss of the righting reflex,LORR）后继续维持30min,停药10min后灌注取脑;S组经尾静脉以相同速度输注等剂量生理盐水,并在停止输注10min后灌注取脑。行为学实验通过LORR时间和翻正反射恢复（Recovery of righting reflex,RORR）时间对比大鼠丙泊酚麻醉的诱导和苏醒时间;通过麻醉深度评分表比较大鼠在丙泊酚麻醉及苏醒期间的麻醉深度评分;在体脑电记录观察大鼠在丙泊酚麻醉期和苏醒期间的脑电变化;免疫荧光染色观察VTA内DAT蛋白、前额叶皮层（PFC）c-fos蛋白表达情况;Western blot法检测PFC内c-fos的蛋白含量。结果:与NC组比较,6-OHDA组LORR时间缩短,RORR时间延长（P<0.05）;与S组比较,P组VTA内DAT表达降低（P<0.05）;与NC组比较,DAT-RNAi组LORR时间无明显改变（P>0.05）,RORR时间缩短（P<0.05）;与NC组比较,DAT-RNAi组大鼠在丙泊酚麻醉期间麻醉深度无统计学差异（P>0.05）,在丙泊酚麻醉苏醒期间,DAT-RNAi组大鼠麻醉深度评分更低（P<0.05）;脑电图在丙泊酚麻醉期间α波、β波频率增多（P<0.05）,在丙泊酚苏醒期间β波频率增多,θ波频率减少,丙泊酚麻醉苏醒期间PFC中c-fos蛋白表达增多（P<0.05）;与NC组比较,AAV-NC组LORR时间和RORR时间、丙泊酚麻醉及苏醒期间麻醉深度评分、丙泊酚麻醉及苏醒期间的脑电图、丙泊酚麻醉苏醒期PFC中c-fos蛋白表达均无统计学差异（P>0.05）。结论:敲低VTA内DAT,可促进大鼠从丙泊酚麻醉中苏醒。
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