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猪捷申病毒(PTV)属于小RNA病毒科捷申病毒属,目前至少有11个血清型,每个血清型引起的临床症状不尽相同。PTV感染猪后主要引起猪的非化脓性脑脊髓炎、繁殖障碍、肺炎、下痢、心包炎、心肌炎和皮肤损伤等。PTV最早暴发于欧洲,给欧洲的规模化养猪造成了巨大的经济损失。目前在我国也存在PTV,但是对于此病毒在国内的流行情况和混合感染情况还不清楚。本研究根据国内外有关检测PTV、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)发表文献的PCR文献报道,对比GenBank中登录的这三种病毒的序列,选出三对引物,建立了检测PTV、CSFV和PRRSV三种病毒的mRT-PCR检测方法,结果该方法有较好的特异性和敏感性;利用该方法对69份送检病料样品进行检测,结果PRRSV、CSFV和PTV阳性率分别为28.99%、27.54%和56.52%,其中PRRSV和CSFV混合感染率为4.35%,PRRSV和PTV的混合感染率为11.59%,CSFV和PTV的混合感染率为13.04%,三种病毒的混合感染率为8.70%。同时,为进一步检测PTV和猪圆环病毒2型(PCV2)的混合感染情况,随后用同样的方法建立了检测PTV和PCV2两种病毒的二重PCR检测方法,特异性和敏感性均较好;对临床送检的127份组织样品进行检测,结果表明,PCV2和PTV阳性率分别为99.21%和46.88%,二者混合感染率为46.88%。综上发现:PTV在我国广泛存在,且存在与PRRSV、CSFV和PCV2的混合感染。VP1是PTV的主要免疫原,为建立猪群PTV的血清流行病学检测方法,本研究根据PTV-8 Jilin/2003的VP1基因序列设计一对引物,扩增VP1全长基因,克隆至原核表达载体pET-30a中,获得重组质粒pET-VP1,并实现在大肠杆菌Rosetta中的高效表达,经鉴定表达的重组蛋白分子量为36.2ku,免疫印迹试验表明获得的重组蛋白具有良好的反应原性。应用His·Bind亲和层析柱纯化重组蛋白,以纯化后的重组蛋白作为ELISA诊断抗原,优化反应条件,建立了检测PTV抗体的rVP1-ELISA方法。试验确定了最佳抗原包被浓度为1ug/mL;待检血清最佳稀释倍数为1:100,作用时间为60min;酶标二抗最佳稀释倍数为1:5000,作用时间为30min;封闭液为8%的脱脂乳;显色时间为10min;阴阳性临界值为0.3。特异性、敏感性和重复性试验表明该方法特异、敏感、重复性好,适于PTV抗体检测,对天津、吉林、黑龙江不同地区共633份猪血清样品,结果显示PTV阳性感染率从72.73%到90.57%不等,平均阳性率为88.10%,表明我国猪群中PTV抗体阳性率很高。综上可见:PTV广泛存在于我国发病猪体内,进行病毒感染的血清学调查结果显示PTV也有很高的抗体阳性率;由此证明,PTV在我国呈地区普遍流行的趋势。