【摘 要】
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目的:采用融合表达方式获得T4N5蛋白,并对该蛋白进行脂质体包被。 方法:通过全基因合成技术获得含有凝血酶识别位点的基因序列,构建重组表达载体pET-32a-thrombin-T4N5。
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目的:采用融合表达方式获得T4N5蛋白,并对该蛋白进行脂质体包被。 方法:通过全基因合成技术获得含有凝血酶识别位点的基因序列,构建重组表达载体pET-32a-thrombin-T4N5。转化表达菌Origami DE3并筛选得到重组人T4N5的工程菌。经基因测序和蛋白表达验证后,进行发酵表达。纯化回收的融合蛋白经凝血酶酶切、镍亲和层析反相C18精纯化,获得高纯度的重组T4N5蛋白,并进行脂质体包被,通过体外实验和动物实验,初步确定其活性。 结果:成功构建了重组载体pET-32a-thrombin–T4N5,重组质粒转化表达菌Origami DE3构建的工程菌,经诱导表达的融合蛋白占菌体总蛋白的20％以上。凝血酶酶切效率不低于80%。制备的T4N5,质谱分子量与理论值一致。质量肽图确定于理论序列一致。制备的T4N5的纯度达到90%以上。体内外活性测试结果显示,其具有明显的修复紫外线导致的DNA损伤的能力。
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