810nm弱激光对急性脊髓损伤大鼠的治疗作用及机制初探

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脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)可直接导致神经功能的丧失,具有非常高的致残率和死亡率,并且脊髓损伤患者大多数是年轻人,脊髓损伤造成的后果对家庭和社会影响巨大。迄今为止,脊髓损伤的治疗和功能恢复仍是一个世界性的难题。在临床工作中,除了在脊髓损伤后8小时内给予大剂量激素(如氢化可的松和甲基强的松龙)治疗有一定的效果外,还没有公认的其他方法能有效的治疗和缓解脊髓损伤。弱激光因与生物组织相互作用可产生特殊的生物刺激效应而在临床中形成了一种新的物理治疗方法——弱激光疗法(Low-level laser therapy, LLLT)。现阶段,弱激光疗法已经被广泛的应用于临床各科室如针灸科、理疗科等,并且取得了可喜的临床治疗效果。关于弱激光疗法在刺激神经再生方面的研究也在大量开展,越来越多的研究结果显示弱激光疗法可以促进周围神经损伤中神经轴突的再生和功能恢复。弱激光疗法在治疗外周神经损伤中取得良好前景的同时,越来越多的研究者也在思考,弱激光疗法是否也会促进脊髓损伤的修复呢?近年来,本课题组及国外其他实验室均报道了弱激光经皮照射可以促进脊髓损伤大鼠瘫痪后肢的功能恢复,但对弱激光产生脊髓损伤修复效应的深层次机制却知之甚少。脊髓损伤过程主要包括原发性损伤和继发性损伤,虽然原发性损伤是不可逆的,但是继发性损伤却是可以减轻和逆转的,我们从弱激光照射对脊髓损伤早期继发性炎症反应的影响和对脊髓损伤修复阶段胶质瘢痕形成的影响这两个方面入手展开了探索性实验研究。本研究分两部分进行。第一部分应用Allen造模法制备大鼠急性脊髓损伤模型,而后辅以810nm弱激光进行经皮照射治疗;检测研究弱激光照射对损伤脊髓组织内前炎症因子肿瘤坏死因子α、白介素-6和白介素-10表达的影响。方法:68只SD大鼠随机分为正常组、SCI组和Laser组,Laser组应用810nm弱激光经皮照射相应的脊髓损伤节段。分别于术后1d、3d和7d进行BBB评分;1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d取材,ELISA法检测受损脊髓组织内TNF-α、IL-6和IL-10的表达情况。结果:照射后7d Laser组大鼠BBB评分高于SCI组,且有统计学意义(P<0.05);与SCI组相比,Laser组受损脊髓组织内TNF-α和IL-6的表达量均降低,且在术后6h、12h、1d(TNF-α)和6h、12h、5d(IL-6)差异有统计学意义(P<0.05);IL-10的表达量在各个时间点均增高,且在术后1d、3d、5d和7d差异有统计学意义(P<0.05)。结论:弱激光照射能明显抑制脊髓损伤早期前炎症因子TNF-α和IL-6的表达,促进抑炎因子IL-10的表达,促进损伤后期大鼠运动功能的恢复。第二部分系统评价弱激光照射后大鼠后肢运动功能的恢复情况,探索弱激光照射对受损组织内胶质瘢痕主要组分NG2和表征轴突生长能力的GAP-43表达变化的影响。方法:通过已建立的大鼠脊髓损伤模型和810nm弱激光理疗平台,应用BBB评分、足印迹实验和电生理检测多种评价方法评价弱激光照射后脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复情况,应用免疫荧光双标染色、Western blot实验和Rt-pcr实验从蛋白分子水平和基因水平研究弱激光照射对NG2和GAP-43表达变化的影响。结果:BBB评分和足印迹实验均显示损伤后7d、14d和21d弱激光照射组大鼠较损伤对照组大鼠有更显著的后肢运动功能恢复(P<0.05);大鼠后肢胫骨前肌运动诱发电位(MEPs)检测显示弱激光照射有助于脊髓下行传导束功能的恢复,并能明显缩短恢复时间;H/E染色显示弱激光照射后脊髓出血水肿减轻,损伤后期空洞范围明显减小(P<0.05);免疫荧光双标、Western blot实验和Rt-pcr实验均显示Laser组大鼠损伤后7d、14d和21d受损脊髓组织内NG2蛋白表达显著下降,GAP-43蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:810nm弱激光经皮照射可以促进脊髓损伤后期大鼠后肢运动功能的恢复,在达到更好恢复效果的同时缩短恢复时间;弱激光照射可以降低胶质瘢痕主要组分NG2蛋白的表达,促进GAP-43蛋白的表达,提示这可能是弱激光促进脊髓损伤修复机制中的一个关键环节。
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