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目的:观察并探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor)和缺血预处理应用于SD大鼠的真皮下血管网皮片,对皮片周缘血管增殖、血运重建及皮片成活率的影响。研究在真皮下血管网皮片基底血运被阻断,皮片仅依靠周缘血供重建时,皮片可能的成活面积和成活部分的平均宽度。为临床上在无血管区创面行真皮下血管网皮片移植术提供实验依据。
方法:将40只健康SD大鼠随机分为A、B、C、D四组。A组为对照组,B组为缺血预处理组,C组为缺血预处理加生理盐水组,D组为缺血预处理加VEGF组。于大鼠背部设计皮片,皮片长宽比例1:1,间距2~3cm。分别设计出1×1cm2、2×2cm2、3×3cm2三种大小的皮片。A 组根据设计切取真皮下血管网皮片,逐层切开皮肤、皮下组织,包括背部肉膜层,在背部肌膜的浅面进行,彻底游离掀起皮片。皮片基底与受皮区基底间塞入片状硅胶膜以阻断基底血供。将皮片水平翻转180°(对边扭转)后,间断缝合于创面;B组:皮片设计同A组,皮片切取时,仅切开皮片四边,不游离皮片基底,再间断缝合各切口。于术后72小时拆线,彻底游离皮片基底部,并掀起皮片,皮片基底与受皮区基底塞入片状硅胶膜以阻断基底血供,将皮片水片翻转180°后缝合闭合创面:C组:皮片设计及缺血预处理同B组,于术后72小时拆线、游离基底部,皮片基底与受皮区基底塞入片状硅胶膜以阻断基底血供,以生理盐水阵点式注射于皮片周缘和基底及受区周缘软组织内,将皮片水片翻转180°后缝合闭合创面;D:皮片设计和缺血预处理同B组,术后72小时后游离基底部,将1‰VEGF溶液(VEGF2μg,生理盐水2ml)阵点注射于皮片与受区的周缘软组织内,皮片基底与受区基底塞入片状硅胶膜以阻断基底血供,将皮片水片翻转180°后缝合闭合创面。分别于移植术后第7天观察皮片的成活情况,应用图像分析系统测量皮片成活部分面积,测量并计算出成活周缘的平均宽度。取标本进行组织学观察,主要观察微血管和细胞增殖情况,于等宽的面积内随机选取10个高倍镜视野,计算新生血管数量。
结果:
1、大体观察:
(1) 1cm2大小的各组皮片几乎完全成活,4cm2和9cm2大小的各组皮片均出现中心部分点片状皮肤色黑、质硬,坏死,皮片边周缘出现宽度不等不规则的成活区,色泽稍暗,质地可。
(2) 用图像分析系统测量各皮片成活面积,进行统计学分析。1cm2大小的各组皮片几乎完全成活,各组间无统计学差异。4cm2和9cm2大小的皮片,B、C、C组均与A组有统计学差异。各实验组皮片成活面积明显高于对照组。因各组1cm2皮片都几乎完全成活(成活部分平均宽度均为0.5cm),遂仅测量并计算出各组4cm2和9cm2皮片的成活部分平均宽度,经统计学分析A组和B、C、D组均有明显统计学差异。通过以上对皮片成活面积和成活部分平均宽度的统计学分析,表明VEGF和缺血预处理可明显改善皮片血运重建,提高移植皮片成活率。
2、组织学观察:
(1) A组可见表皮部分坏死剥脱,皮肤组织层次破坏较重,大量中性粒细胞及单核细胞亲润,可见少量萎缩血管,罕见新生毛细血管。
(2) B、C组可见表皮部分坏死剥脱,皮肤组织层次较清晰,皮下脂肪层可见较多毛细血管,管腔大小不一,真皮深层可见少量毛细血管,部分管腔较大,管壁完整性较好。
(3) D组可见皮肤组织层次清晰,表皮连续性好,全层炎性细胞侵润较轻,真皮内及真皮下脂肪层中可见大量毛细血管,血管密度较大,其中管腔较大的血管明显较其他组多。
(4) 组织切片在100倍光镜下,每张切片随机计算10个视野中血管断面个数,取平均值。经统计学分析,对于三种大小的皮片,A组均和B、C、D组有统计学差异。这说明缺血预处理和VEGF可明显刺激皮片周缘毛细血管增殖。
结论:
1、通过本实验观察表明:在真皮下血管网皮片基底血运建立通道被阻断时,缺血预处理和VEGF联合应用于皮片,可增加皮片周缘与受区吻接血管的数量,加速毛细血管化,明显促进皮片周缘与受区的血供重建,提高了真皮下血管网皮片在无血管区的移植成活率。
2、通过本次实验我们可以了解到,当真皮下血管网皮片仅依靠周缘血供重建时,仍能部分成活。尽管人类皮肤同大鼠皮肤有许多不同,但根据本次实验中对皮片成活部分平均宽度的测量及统计学分析,为我们在相应大小的无血管区行真皮下血管网皮片移植术提供了一定的实验依据。