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【研究目的】慢性疼痛的发病率在全球范围内接近20%~25%。目前的治疗方法无法使大部分慢性疼痛患者解除痛苦。因此，有必要探寻治疗慢性疼痛的新方法，这会使很多患者改善生活质量。三叉神经痛(trigeminal neuralgia，TN)是一种三叉神经分布区域中的反复的刀刺般剧痛的疾病。这种发作存在扳机点，特别在说话、咀嚼、刷牙、剃须以及轻触时，甚至凉风也能引起。这种发作常常是单侧的，一天之内可能重复出现，非常痛苦。然而由于其发病机制尚不完全清楚，到目前为止，临床上仍缺乏满意地镇痛药物。TN发作时三叉神经轴上各级神经元（三叉神经节神经元和三叉神经感觉主核、脊束核、下丘脑、大脑皮层的神经元）兴奋性提高，易化性增强，痛觉阈值降低。这种兴奋性的提高导致在受到轻微刺激或无刺激时，神经元阵发性大幅度放电，传入中枢引起剧痛。但是这些神经元兴奋性的极度提高和大幅度放电的形成原因是什么，尚需进一步研究。P2受体是病理性疼痛传递中的关键蛋白，可以被外周伤害性刺激激活，引起背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)神经元或者TG神经元细胞膜去极化。Kv通道由于参与动作电位的调节而成为疼痛治疗的潜在的靶标。最近有报道称选择性的Kv7通道的开放剂(retigabine)可以选择性地降低伤害性感受传入纤维的兴奋性。在三叉神经病理性疼痛或者炎性痛模型中，KV通道介导的I_A和Ik与正常大鼠相比显著降低。由于I_A和Ik在神经元动作电位的发生频率和间期的调节中起到了重要的作用。因而本实验拟利用痛觉行为学，电生理学和分子生物学等方法探讨P2受体对KV通道的调节及机制，研究参与调节I_A通道的P2受体亚型及其中的途径，从而寻找三叉神经病理性痛相关的靶点，为临床治疗提供理论依据。【研究方法】1、动物分组：①正常SD雄性大鼠200~250g,随机分组进行免疫组化双标实验：荧光金(FG)和P2Y2；P2Y2与Kv1.4；P2Y2与Kv3.4；P2Y2与Kv4.2；P2Y2与Kv4.3。正常SD雄性大鼠80~120g，培养TG神经元随机分组，分别给予UTP/ATP，Surmain和U0126等药物处理。②ION-CCI大鼠：SD雄性大鼠200~250g,随机分为假手术组和手术组。2、实验方法：①大鼠ION-CCI术；②经眶下孔达TG目标注射给药法；③大鼠痛觉行为学测定；④三叉神经节细胞分离培养；⑤免疫荧光组织化学方法和细胞免疫荧光化学方法；⑥P2Y2反义寡核苷酸干扰方法；⑦实时定量RT-PCR；⑧Western blotting；⑨细胞电生理记录。【结果】一、正常大鼠1、ATP对TG神经元快速作用：电生理结果显示，在培养的大鼠TG神经元上给予ATP后，①产生T型ATP电流的TG神经元IA被抑制，IA峰电流从(4.18±0.63) nA(n=14)减小到(1.34±0.22) nA (n=13)，(P<0.05，paired t-test)；②产生S型ATP电流的TG神经元IA无显著影响；③部分ATP不敏感型TG神经元IA也受到抑制。2、免疫荧光组化方法显示：P2Y2受体与介导IA的Kv通道亚型Kv1.4, Kv3.4, Kv4.2以及Kv4.3分别高比率地共同表达在TG神经元上。3、ATP对TG神经元长时程作用：①电生理结果显示，激活的P2Y2受体降低大鼠TG神经元产生动作电位的阈电流：147.1±32.9pA变为58.3±10.3pA (control: n=7;UTP: n=9，**P＜0.01)，增加动作电位数目(control:1.3±0.9spikes400ms, n=3; UTP:10.8±3.5spikes400ms, n=4,*P <0.05)；②电生理结果显示，激活的P2Y2受体对IA的抑制作用可被选择性P2Y2受体阻断剂Suramin阻断(control：0.14±0.01nAvsUTP：0.09±0.01pA, n=20, P <0.05; Suramin：0.13±0.01pA, n=9, P>0.05vscontrol)；③电生理结果显示，激活的P2Y2受体对IA的抑制作用可被ERK拮抗剂U0126阻断(Control：0.14±0.01nA vs UTP：0.09±0.01pA, n=20, P <0.05; U0126:0.15±0.03pA, n=11, P>0.05vs control)；④实时定量RT-PCR结果显示，激活的P2Y2受体显著抑制Kv1.4, Kv3.4, Kv4.2以及Kv4.3的mRNA表达。二、ION-CCI大鼠1、免疫荧光组化方法显示：ION-CCI术后，大鼠P2Y2受体阳性的神经元表达Kv1.4,Kv3.4, Kv4.2以及Kv4.3显著减少。2、ION-CCI大鼠，经眶下孔达TG目标注射给药法给予Suramin，其触须垫部位机械痛阈呈剂量依赖性恢复(saline:0.96±0.4g n=8, Suramin0.3:11.45±2.4g n=7, Suramin3:29.96±4.1g n=6,**P<0.01;##P<0.01vs Suramin0.3)，维持45min。3、ION-CCI大鼠，经眶下孔达TG目标注射给药法给予P2Y2反义寡核苷酸（P2Y2受体下调），其触须垫部位机械痛阈显著恢复(saline:0.49±0.1g n=7; antisense:49.54±8.0g n=5, P<0.001)，维持120h。4、 ION-CCI大鼠，经眶下孔达TG目标注射给药法给予P2Y2反义寡核苷酸（P2Y2受体下调），ION-CCI大鼠TG神经元Kv1.4, Kv3.4, Kv4.2mRNA表达显著增加。5、 ION-CCI大鼠，经眶下孔达TG目标注射给药法给予P2Y2反义寡核苷酸（P2Y2受体下调），大鼠TG神经元中pERK的蛋白表达显著降低。【结论】在大鼠三叉神经节神经元，P2Y2受体可能通过ERK途径，下调TG神经元Kv1.4、Kv3.4和Kv4.2表达，进而提高TG神经元兴奋性。P2Y2受体下调可显著逆转ION-CCI大鼠面部痛觉过敏。这些结果提示控制P2Y2受体的表达将成为临床神经病理性痛治疗的关键措施之一，将为寻找新型的神经病理性痛治疗药物提供理论依据。