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目的;真菌性角膜炎是一种严重的致盲性眼病,发病率呈明显上升趋势,占感染性眼病的比例逐年增大,近年我国多地区统计显示真菌性角膜炎已跃居感染性角膜疾病的首位。而临床上对真菌性角膜炎的处理颇为棘手,缺乏低毒、特异、有效的抗真菌药物,部分患者在药物治疗期间病情加重,即使手术治疗仍有少数患者最终丧失眼球,因此,近年来该病已引起眼科医生的关注。探索疾病治疗方法首先是进行基础研究,而进行基础研究的基本途径就是建立标准有效的动物模型,但是目前报道的多种方法存在缺少统一标准、感染率低、可重复性不高及依赖糖皮质激素等缺点。因此本研究探索一种新的方法:改良角膜表层镜法,在不应用糖皮质激素和免疫抑制剂的情况下,建立常见致病真菌性角膜炎小鼠模型,以便为进一步进行基础研究尤其是免疫学和分子遗传学发病机制做准备,同时观察菌丝在小鼠角膜基质内的生长方式等特点。
方法;选取3种临床常见的致病真菌:茄病镰刀菌、烟曲霉菌、白色念珠菌,近交系BALB/c小鼠,应用改良的角膜表层镜法,即刮除角膜上皮,大鼠角膜片覆盖其上,二者层间注入菌液,缝合眼睑。按菌液浓度和闭合眼睑时间不同分组对比研究,拆除眼睑缝线后进行裂隙灯检查、临床评分、刮片、组织病理学检查及角膜组织定量培养,筛选最佳方法。
结果;(1)白色念珠菌组:菌液浓度1×108CFU/ml,闭合眼睑48h,小鼠角膜感染率100%,角膜溃疡重.持续时间长(>8天),PAS染色见大量菌丝,菌丝生长方式总体上呈垂直生长趋势,浸润角膜深基质层,甚至穿透角膜进入前房,角膜易穿孔,前房炎症反应重。真菌培养阳性,定量培养角膜内真菌数量随时问推移逐渐减少。(2)烟曲霉菌组:菌液浓度1×108CFU/ml,闭合眼睑72h,小鼠角膜感染率83.3%,但轻重不等,持续时问长短不一(4-8天),且发现溃疡呈全板层剥离现象,角膜缘新生血管增生早且迅速,溃疡自愈倾向明显,PAS染色见菌丝浸润角膜全层,生长方式总体上呈垂直生长趋势,真菌培养阳性。(3)茄病镰刀菌组:菌液浓度1×108CFU/ml,闭合眼睑72h,小鼠角膜感染率91.7%,均为重度感染,持续时间长(>8天),PAS染色见菌丝生长方式总体上呈垂直生长趋势,且易穿透角膜进入前房,甚至穿透晶体囊膜浸润晶体皮质。角膜组织定量培养真菌数量逐渐减织结构、宿主的防御能力及其与真菌毒力的相互抑制剂情况下,改良角膜表层镜法可以成功诱导白色念珠菌和茄病镰刀菌感染BALB/c小鼠角膜炎,可以用于真菌性角膜炎发病机理尤其免疫学及分子生物学等机制的研究;烟曲霉菌致BALB/c小鼠角膜感染率相对较低,自愈较迅速,可以扩大样本增加感染数量用于早期发病机制研究。三种真菌菌丝在BALB/c小鼠角膜基质内生长方式总体上均呈垂直生长趋势。与以往真菌性角膜炎兔模型研究对比发现,同一菌株(茄病镰刀菌)在不同物种宿主角膜内表现为不同的生长趋势,其原因可能与宿主角膜的组织结构、宿主的防御能力及其与真菌毒力的相互作用不同有关,具体机制尚需进一步实验研究。