【摘 要】
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双酚A(Bisphenol A,BPA)作为环氧树脂和聚碳酸酯的合成单体被广泛用于生产生活中,是一种典型的内分泌干扰物(Endocrine disrupting chemicals,EDCs)。目前,已经在多种环境介质中检测出BPA,BPA会对暴露于其中的生物体造成内分泌干扰、神经毒性、免疫毒性等不利影响。微生物降解BPA是一种经济、环境友好的去除方式,受到了专家学者的广泛关注。由于深海火山喷发形
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双酚A(Bisphenol A,BPA)作为环氧树脂和聚碳酸酯的合成单体被广泛用于生产生活中,是一种典型的内分泌干扰物(Endocrine disrupting chemicals,EDCs)。目前,已经在多种环境介质中检测出BPA,BPA会对暴露于其中的生物体造成内分泌干扰、神经毒性、免疫毒性等不利影响。微生物降解BPA是一种经济、环境友好的去除方式,受到了专家学者的广泛关注。由于深海火山喷发形成的热液区具有高压、高温、黑暗、低营养等特征,因此,其中的微生物具有独特的生理机制。本研究利用深海热液区沉积物分离的微生物高效快速降解BPA,且具有耐盐、耐高温的特性,为深海微生物资源应用于环境的潜力评价提供了数据支持,也拓展了BPA降解菌资源库。主要研究结果如下:本研究从大西洋深海热液区沉积物中分离出一株具有BPA降解能力的菌株,经过16S r RNA和基因组测序,该菌株被鉴定为Bacillus altitudinis HQ-51-Ba。使用单因素优化法对BPA降解条件进行优化,发现该菌株对p H值(6-8)、温度(30-40oC)具有很强的适应性,且在培养温度为40oC下具有最大的细菌增殖。优化条件下,接种体积3 m L、葡萄糖浓度0.36 g·L-1、p H值6.0、培养温度30oC,10 mg·L-1的BPA在11 h内完全降解。利用UPLC-HRMS对BPA降解过程中产生的中间产物进行分析,经过鉴定,降解过程产生五种中间产物,分别是4-(2-羟丙基)苯酚(A)、1,2-双(4-羟基苯基)-2-丙醇(可能)(C)、对羟基苯乙酮(HAP)(E)、对羟基苯甲酸(HBA)(G)、2-甲基丁酸(I),并且依据中间产物提出菌株HQ-51-Ba对BPA的降解途径。对HQ-51-Ba进行基因组测序,并且提交到Gen Bank数据库(登录号:CP0407047)。菌株HQ-51-Ba基因组大小为3.70 Mb,GC含量41.36%,此外还有2个质粒(plasmid A,7.206 Kb;plasmid B,7.089 Kb),经过预测得到3930个编码序列(Coding sequences,CDS)、21个r RNA基因和70个t RNA基因,其中3131个基因被注释到168个KEGG通路中。通过与已有研究对比获得了2个可能参与菌株HQ-51-Ba的BPA降解过程的基因(cot A和bisd B),共检测到三种cot A和bisd B降解BPA时的中间产物,分别是2-甲基丁酸、1,2-双(4-羟基苯基)-2-丙醇和4-(2-羟丙基)苯酚。使用获得的细菌上清液与细菌裂解液分别对10 mg·L-1BPA进行降解,24 h内细胞裂解液的降解效率是54.16%,而上清液没有降解效果,表明降解BPA的酶没有分泌型表达,因此我们基于能够潜在降解BPA的两种酶(硫氧还蛋白依赖的巯基过氧化物酶(TDT)和肽聚糖编辑因子PGEF酶(PEF-PGEF))的序列,合成基因,构建载体,经过转化、诱导、表达、纯化获得纯酶,利用获得的纯酶降解BPA,研究结果表明TDT和PEF-PGEF酶单独使用不能降解BPA,但可以促进HQ-51-Ba对BPA的降解。和对照组相比,22 h时降解效率分别提高了12.5%和6.9%。
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