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水牛出生时卵巢中含有约数万个原始卵泡，但在水牛生命周期中只有约200个卵泡可以发育成熟并排卵，约99.9％的卵泡在生长过程中闭锁、退化。如何挖掘母水牛的繁殖潜能，开发并应用卵巢中的腔前卵泡，是水牛生殖生理研究的重要课题。本研究的目的是对水牛不同时期腔前卵泡中候选基因的表达进行检测，总结其表达特点及差异，为探明水牛卵泡发生的分子机制，优化水牛腔前卵泡体外培养系统奠定基础。现将相关研究结果总结如下。
1.水牛PCNA蛋白和VASA蛋白在卵巢组织中的表达定位研究。采用石蜡切片结合免疫组化的方法，对水牛PCNA蛋白和VASA蛋白在卵巢组织不同时期卵泡中的表达情况进行定位研究。结果发现，(1)原始卵泡中，PCNA和VASA蛋白在颗粒细胞并未检测到表达，卵母细胞中有表达;(2)初级卵泡中，PCNA和VASA在卵母细胞和部分颗粒细胞中均可检测到较低表达;(3)次级卵泡中，PCNA和VASA在卵母细胞和大多数的颗粒细胞中均可检测到表达，但VASA在卵母细胞核中未表达;(4)在有腔卵泡中，PCNA在颗粒细胞、卵泡膜细胞及卵母细胞周围的卵丘细胞中均有很强的表达，而VASA在这些细胞中均未检测到表达;随着卵泡的增长，PCNA蛋白的表达有明显的上升趋势，而VASA在各时期卵泡中的表达有明显差异。
2.水牛不同时期腔前卵泡中PCNA、FSHR、IGFR-1、IGF-Ⅱ、IGFR-2、FGF-2、FGFR-2 mRNA的表达研究。分离水牛原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡，应用QRT-PCR的方法检测了其mRNA在不同时期腔前卵泡中的表达变化。结果显示:(1) PCNA在各级腔前卵泡中均有表达，且表达量呈上升趋势，初级卵泡中的表达量显著高于原始卵泡(1.63±0.09 vs1±0.01，P＜0.05)，次级卵泡中的表达量约为原始卵泡中的43倍，且极显著高于初级卵泡（43.50±0.14 vs1.63±0.09 vs1±0.01，P＜0.01），与免疫组化结果一致。(2) FSHR在水牛原始卵泡中未能检测到表达，在次级卵泡中的表达量显著高于初级卵泡（1.64±0.09 vs1±0.10，P＜0.05）。(3) IGFR-1在各级腔前卵泡中均有表达，且呈上升趋势，其中初级卵泡中的表达量显著高于原始卵泡（1.93±0.004vs1±0.07，P＜0.05），而次级卵泡中的表达量极显著高于原始和初级卵泡，且约为原始卵泡的12倍（12.07±0.02 vs1.93±0.004 vs1±0.07，P＜0.01）。(4) IGF-Ⅱ在各级腔前卵泡中均有表达，且呈上升趋势，其中次级卵泡和初级卵泡中的表达量显著高于原始卵泡（5.59±0.46 vs3.60±0.35 vs1±0.40，P＜0.05），次级卵泡与初级卵泡中的表达量无显著差异(P＞0.05); IGFR-2在各级腔前卵泡中的表达量呈上升趋势，其中次级卵泡中的表达量极显著高于原始卵泡和初级卵泡的表达（10.74±0.01 vs1.24±0.07 vs1±0.05，P＜0.01），后两者之间无显著差异。(5) FGF-2在各级腔前卵泡中均有表达，且呈下降趋势，其中原始卵泡中的表达量显著高于初级和次级卵泡（1±0.16 vs0.60±0.18 vs0.51±0.09，P＜0.05），而初级卵泡和次级卵泡中的表达量无显著差异;FGFR-2在各级腔前卵泡中均有表达，且呈上升趋势，其中次级卵泡中的表达量显著高于原始和初级卵泡，而初级卵泡中的表达量又显著高于原始卵泡中的表达量（2.74±0.16 vs1.47±0.09 vs1±0.05，P＜0.05）。上述结果表明，随着卵泡的发育，FSHR、IGFR-1、IGF-2、IGFR-2以及FGFR-2 mRNA在原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡中的表达呈上升的趋势，而FGF-2 mRNA的表达量却呈下降趋势，可能与卵泡发育的内分泌生理环境变化有关。研究结果为优化水牛腔前卵泡培养体系提供了一定的分子依据。