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禽白血病病毒(Avian Leukosis Viruses,ALVs)是反转录病毒科α反转录病毒属的成员之一。目前,在鸡群中发现了6个亚群的ALV,其中A、B、C和D亚群是经典外源性的ALV。E亚群主要以前病毒的形式存在,是内源性的ALV。而J亚群禽白血病病毒(ALV-J)是20世纪90年代初被鉴定出的新亚群(Payne等,1991)。其中A、B亚群是鸡群中较常见的ALV,而C、D亚群较少见。由于采取了严格的切断垂直传播和将未感染的后代隔离饲养的净化措施,从1987年以后国际发达国家的大型种鸡公司中就已经宣布将外源性鸡白血病病毒净化了。但美国不久前报道了从马立克氏病疫苗中分离到了ALV-A,而我国长期使用从国外进口祖代鸡和进口疫苗,并且从来没有对ALV采取过净化措施,因此,我国的鸡群中可能已经存在A亚群禽白血病。近几年对ALV感染的血清学调查证明了ALV-A感染的普遍性,并且从中国的鸡群中分离到了ALV-A,证实了中国鸡群中A亚群禽白血病的存在。为了研究出一种能够针对A亚群禽白血病的快速特异性诊断试剂和具有保护作用的疫苗,进行了如下实验。1禽白血病A亚群病毒gp85基因的鉴定和表达将本实验室分离的A亚群禽白血病病毒(ALV-A)SDAU09E1株接种于DF1细胞上,收集细胞,提取细胞总DNA,以感染细胞DNA为模板,通过PCR方法扩增出1023bp的ALV-A-gp85基因。将此基因按正确阅读框架插入表达载体PET-32a(+)中,构建成表达重组质粒PET-SDAU09E1-gp85。通过将重组质粒转化克隆性大肠杆菌DH5q进行克隆、测序和双酶切鉴定,并同时转化和IPTG诱导的BL21(Rosetta)宿主菌,经SDS-PAGE分析,表达出52.8kDa重组融合蛋白。2禽白血病A亚群病毒gp85单因子血清的制备及特异性鉴定将表达融合蛋白的宿主菌进行裂解纯化、透析复性,并用分光光度法定量,与弗氏佐剂进行1：1混合乳化后,进行常规免疫6周龄昆明白小鼠,收集血清。经间接免疫荧光技术(IFA)利用已知的ALV-A、ALV-B和ALV-J对小鼠血清进行鉴定并应用于临床样品的诊断。实验成功获得的重组融合蛋白具有良好的免疫原性,所诱发的小鼠血清对A和B亚群ALV呈阳性反应,但不与J亚群ALV发生反应。该实验首次在国内外研制出能用于鉴别性检测经典的A/B亚群ALV的单因子血清,可与ALV-J特异性单抗互补作用于外源性ALV感染的鉴别性诊断。3.禽白血病A亚群病毒gp85疫苗的制备及其效果鉴定按2中的方法制备成的油乳剂疫苗,常规免疫某国外进口祖代尼克红4月龄蛋鸡,通过对每周的抗体水平调查检测,发现该免疫程序可以诱发维持8周的特异性抗ALV-A和ALV-B的抗体,并且在此鸡抗体维持期间收集产下的鸡蛋,检测到卵黄中含有抗ALV-A和ALV-B的母源抗体存在,但将该含有母源抗体的受精鸡蛋进行孵化,并对孵出的小鸡在1、3、5、7、9、14日龄采血,并进行抗体检测,发现卵黄中的母源抗体较低,在孵出的雏鸡中未能检出。该实验说明制备的针对A亚群禽白血病的疫苗已经初步成功,能够诱发机体产生针对ALV-A和ALV-B的抗体,并且能传递至卵黄中。而发现卵黄中的母源抗体较低,在孵出的雏鸡中未能检出,因此该实验仍需进一步研究和完善。