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目的：本室前期研究表明脑缺血／再灌注早期，GluR6能发生巯基亚硝基化，产生一系列级联反应，从而介导了神经元的凋亡[1]。然而，给予KAR激动剂海人藻酸(Kainic acid，KA)模拟癫痫的动物模型中KA受体蛋白GluR6是如何变化的还尚待进一步研究。本文拟研究海人藻酸KA是否能诱导GluR6发生同样的亚硝基化过程，及其亚硝基化发生的确切分子机制，并观察一些相关药物对癫痫造成的神经元损伤的保护作用，为临床治疗癫痫等疾病提供理论线索。
方法：在脑室注射0.6μgKA/10μl模拟的大鼠癫痫模型中，分别给予GluR6的拮抗剂NS102(20mM)，nNOs抑制剂7-NI(25mg/kg)，外源性NO供体SNP(5mg/kg)和GSNO(0.1mg/kg)，L型钙通道拮抗剂尼夫地平(NF，20mg/kg)、RyR拮抗剂(TH:0.5μg/5μl、2μ,g/5μl、5μg/5μl)和胞内钙离子螯合剂BAPTA(10nmol/5ul)、钙泵抑制剂(Thapsigarin，1mM)和IP3R拮抗剂(2-APB，5nmol/5μl)等药物，并采用生物素转化法和免疫印记等方法观察GluR6巯基亚硝基化水平的相应变化，运用焦油紫染色法研究海马CA1和CA3/DG区神经元细胞存活和丢失。
结果：1）KA受体激动剂海人藻酸可以诱导GluR6的半胱氨酸巯基发生亚硝基化，且其亚硝基化水平具有一定时间依赖性。给予KA受体亚基GluR6的拮抗剂NS102(20mM)可以抑制该反应。2）KA诱导的GluR6亚硝基化水平与NO密切相关：给予nNOs抑制剂7-NI(25mg/kg)减少内源性NO产生可以抑制GluR6的亚硝基化；而给予外源性NO供体SNP(5mg/kg)和GSNO(0.1mg/kg)却反而使其亚硝基化的水平升高。3）实验证明KA诱导的GluR6亚硝基化水平还与Ca2+浓度有很大关联：给予L型钙通道拮抗剂尼夫地平(NF，20mg/kg)、RyR拮抗剂(TH，5μg/5μl)和胞内钙离子螯合剂BAPTA(10nmol/5ul)均能显著降低其亚硝基化水平，而给予内质网Ca2+-ATP酶抑制剂Thapsigarin(1mM)则会显著增强其亚硝基化作用，IP3R的拮抗剂则对GluR6的巯基亚硝基化基本没有影响。4）焦油紫染色的结果表明抑制GluR6亚硝基化的药物具有抗KA诱导的海马神经元死亡作用。
结论：KA刺激诱导的GluR6巯基亚硝基化通过KA刺激GluR6-KAR活化产生。7-NI，内源性NO来源nNOS抑制剂和外源性NO供体可以降低KA诱导的GluR6的巯基亚硝基化水平。同时，胞浆内Ca2+水平的高低对KA诱导的GluR6巯基亚硝基化也是至关重要的。胞浆内钙离子水平不但受胞外流入的影响，而且受L型钙通道依赖的RyR介导的胞内钙库释放(CICR)的调控，从而进一步激活nNOS，正反馈调节GluR6的亚硝基化作用。阻断该通路，抑制GluR6-KAR巯基亚硝基化的药物，如NS102、GSNO、SNP等等均能对癫痫发病导致的海马CA1和CA3/DG区神经元损伤起保护作用。