LPS诱导巨噬细胞活化过程中Pim-1表达及调控通路的研究

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目的:探讨LPS诱导巨噬细胞活化过程中,Pim-1的动态表达情况及抑制PI3K、P38MAPK、MEK1/2、JAK2信号关键分子对巨噬细胞中Pim-1表达的影响。方法:分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为7组,各组分别用1μg/ml脂多糖(LPS)处理Oh,1h,2h,4h,8h,12h,24h,利用q-RT PCR、Western blot技术检测各组巨噬细胞中Pim-1mRNA及Pim-1蛋白的动态表达情况。分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为6组,各组分别用LPS, DMSO+LPS, LY294002(P13K抑制剂)+LPS, SB203580(P38MAPK抑制剂)+LPS, AG490(MEK1/2抑制剂)+LPS,U0126(JAK2抑制剂)+LPS处理细胞,利用Western blot技术检测各特异性信号分子抑制剂对LPS诱导的巨噬细胞中Pim-1蛋白表达的影响。结果:①LPS刺激能迅速上调巨噬细胞中Pim-1mRNA水平,LPS刺激1h后即可检测到Pim-1mRNA表达增高,Pim-1mRNA高峰在LPS刺激2h出现,约是对照组的6倍,LPS刺激12h后Pim-1mRNA即回落至基础水平。②LPS刺激能迅速上调小鼠腹腔巨噬细胞中Pim-1蛋白的表达,LPS刺激1h后即可检测到Pim-1蛋白表达增高;Pim-1蛋白水平在LPS刺激1-8h后维持增高水平,LPS刺激12h后Pim-1蛋白水平即回落至基础水平。③P13K抑制剂,P38MAPK抑制剂,MEK1/2抑制剂,JAK2抑制剂分别下调巨噬细胞中p-AKT, p-P38, p-ERK, p-JAK2的表达,PI3K、P38MAPK、MEK1/2、JAK特异性抑制剂均能下调LPS诱导的巨噬细胞中Pim-1蛋白表达水平。结论:①巨噬细胞中Pim-1mRNA及蛋白在LPS刺激后迅速表达上调,体现Pim-1早期即刻基因的特性。Pim-1在巨噬细胞早期活化过程中发挥调节作用。②PI3K/AKT、P38MAPK、MEK/ERK、 JAK2/STATs信号通路均参与调控巨噬细胞中Pim-1的表达。
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