低聚半乳糖是一种天然存在的功能性低聚糖,具有独特的理化性质和生理功能。然而酶法制备的低聚半乳糖纯度不高,限制了其的应用。本研究旨在探索对低聚半乳糖产物有效的纯化方法,为低聚半乳糖的研究及应用打下基础。筛选出水解作用弱而转糖苷作用强的β-半乳糖苷酶,制得低聚半乳糖溶液,使用对单糖有发酵作用的酿酒酵母对其进行纯化,采用脉冲安培检测器与高效阴离子交换色谱结合法对结果进行分析。通过对预处理方法、流动相及淋洗条件、检测器条件等的探索,首次建立了分离检测酶法制备的低聚半乳糖溶液的有效方法:使用1%三氯乙酸溶液5mL及2%乙酸铅溶液2mL预处理,高效阴离子色谱分离,125mmol/L氢氧化钠与2mol/L醋酸钠的混合溶液梯度洗脱,配合脉冲安培四电位检测器检测,具体检测电压为E1=+0.10V,E2=-2.00V,E3=+0.60V,E4=-0.10V。并通过对低聚半乳糖混合标准品的检测,确立分析图谱的定性及定量方法。向底物乳糖溶液中添加等量6种商业β-半乳糖苷酶,分析产物中低聚半乳糖的转化率。其中酶Lactase Y“Amano”L转糖苷能力最强,反应4h内转化率即为43.7%,在48h达到最高值46.9%,产出低聚半乳糖共计11种。向酶法制备的低聚半乳糖溶液中添加4种酿酒酵母,反应后产物中的低聚半乳糖纯度均有不同程度的提高。其中椭圆酿酒酵母GIM 2.91效果尤为显著,将低聚半乳糖纯度从对照组的30.76%提高至39.52%,升幅达28.48%,并将低聚半乳糖的种类由原先的9种增加为10种。使用酿酒酵母的微生物纯化法操作简单、设备成本低,可考虑工业化应用。