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IFN-γ是由激活T细胞和自然杀伤(NK)细胞产生的一种细胞因子,它不仅具有Ⅰ型IFN(α干扰素、β干扰素)的抗病毒和抗肿瘤活性,更重要的是它还具有MHCⅡ类抗原表达、增强APC细胞与T细胞的相互作用、增强T细胞辅助抗体的产生和细胞毒性T细胞生长能力等诸多免疫调节活性。除治疗病毒性疾病外,还可以治疗肿瘤、寄生虫病等。本研究根据GeneBank发表的牛IFN-γ基因(BoIFN-γ)序列(M29867),应用Primer Premier 5.0软件设计了一对特异性引物,用Catrimox-14 RNA IsolationKit Ver.2.11试剂盒提取经ConA(半刀豆蛋白)诱导培养的延边黄牛脾脏淋巴细胞进行RNA提取,通过RT-PCR技术将延边黄牛IFN-γ基因进行克隆并对其进行测序,测序结果表明,所克隆的延边黄牛IFN-γ基因片段长度为446 bp,在开放阅读框内,编码148个氨基酸。对所克隆的BoIFN-γ因序列与基因文库中M29867的序列进行比较分析,其同源性为99.10%,证明该基因片段确为BoIFN*γ基因。将BoIFN-γ基因连接到pET-28a(+)原核表达载体上,阳性菌经酶切鉴定、PCR鉴定和测序分析结果表明,成功地构建了含有目的基因片段的原核表达载体pET-28a(+)-BoIFN-γ。将原核表达载体pET-28a(+)-BolFN-γ转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达,融合蛋白的分子量为34 Ku。在优化条件下,融合蛋白的表达量经Bandscan5.0软件分析占菌体总蛋白的31.7%,表明该基因在大肠杆菌中以包涵体形式融合表达。经SDS-PAGE分析后进行Western-blot鉴定,BoIFN-γ融合蛋白能与通过pET-28a(+)-BoIFN-γ免疫小鼠所得抗体发生特异性结合,而与空载体转化菌无此特异性反应。说明该蛋白在大肠杆菌中获得了正确表达,并且其具有较好的反应原性。对延边黄牛IFN-γ的基因片断克隆与表达。为大量制备动物性干扰素建立了良好体系,并为建立保护性抗原基因的基因工程重组疫苗的研究和开发奠定了基础。