黄曲霉毒素B₁（AFB₁）是由真菌的部分产毒菌株产生的次级代谢产物，广泛存在于各类食品中，在自然界分布也很广泛，它的毒性是最强的。黄曲霉毒素B₁是主要对人类和动物的肝脏、肾脏的能够产生强毒和强致癌，AFB₁主要污染玉米、大豆、饲料等，进入到人和动物体内，它会引起人和动物的很多病变，甚至死亡。世界卫生组织的癌症研究机构（International Agency for Research onCancer, IARC）划定为I类致癌物。要从各个方面严格控制AFB₁对人类食品和动物饲料产生污染，将AFB₁的危害降到最低，开发新的高灵敏的检测AFB₁的方法尤为重要。随着技术的不断发展，时间分辨荧光免疫分析方法（Time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）得到了快速的发展，它具有没有放射性污染、检测灵敏度高、试验操作简便、重复性好等多种优点，另外TRFIA能够满足大量样品的检测。本研究通过分析AFB₁的结构特点，先制备出人工抗原，再通过采集小鼠腹水的方法制备并纯化得到单克隆抗体，成功制备出AFB₁间接竞争TRFIA试剂盒并对其性能进行了评价，确立了常见样品的快速处理方法，为AFB₁快速检测试剂盒的应用及推广打下了基础。采用N-羟琥珀酰亚胺酯（N-hydroxysuccinimide NHS）法和碳二亚氨法（EDC）将AFB₁偶联于载体蛋白BSA上，合成人工抗原AFB₁-BSA。并利用紫外扫描法（UV）、SDS-PAGE凝胶电泳试验及单克隆抗体等手段对人工抗原进行了初步鉴定，结果显示：人工抗原的紫外吸收峰包含AFB₁及蛋白载体的紫外扫描特征峰，且在此基础上出现了偏移；其分子量较载体蛋白也有所增加；具有良好的免疫原性，从而充分说明了AFB₁人工抗原制备成功。采用稀土离子标记技术，应用单克隆抗体建立高灵敏的黄曲霉毒素Bl（AFB₁）时间分辨荧光免疫分析法（AFB₁-TRFIA）。以AFB₁-BSA为免疫原制备抗AFB₁抗体；AFB₁与BSA的联结物（AFB₁-BSA）为固相抗原，与游离AFB₁共同竞争有限的AFB₁抗体；用Eu³⁺标记的羊抗鼠抗体作为二抗。该方法的灵敏度为0.0094μg/L，测量范围为0.01-10μg/L，批内和批间的变异率分别为3.05%和4.71%，平均回收率为91.75%，与黄曲霉毒素B₂对AFB₁的检测有5.12%交叉反应，而赭曲霉毒素A等真菌毒素及BSA则没有交叉反应。试验研究表明，AFB₁-TRFIA是目前在AFB₁检测中最灵敏和简便的方法之一，该分析方法具有稳定性好、可测范围宽，具有很好的应用前景。