昆虫原多酚氧化酶（prophenoloxidase，PPO）是一个重要的天生免疫蛋白，它们的酶联激活反应已有大量文献报道，但是PPO蛋白家族的生化特性仍有许多不清楚的地方，主要原因是难以得到足够的PPO蛋白。我们在原核细胞中成功表达了果蝇的三个PPO蛋白，优化表达条件，调节了培养大肠杆菌诱导温度，明显增加了可溶性重组蛋白的表达，使这些蛋白都具有活性，这项工作为后续的实验奠定了基础。研究结果如下：　　 1．果蝇PPO1、PPO2和PPO3都能在原核细胞中表达。37℃诱导的PPO比16℃诱导的表达量高，但主要在包涵体中表达。16℃诱导时，约有一半目的蛋白存在包涵体中，另一半以可溶性蛋白形式存在。通过Westernblot检测，原核表达的PPO1和PPO3分子量大小基本上与果蝇S2细胞系表达的一致，可能是它们不需要翻译后再修饰或修饰较少；对PPO2而言，真核表达的蛋白比原核表达的略大，可能PPO2需要翻译后再修饰。　　 2．16℃诱导的PPO活性检测。表达PPO蛋白的细菌或其细菌裂解粗提蛋白都可以用30％酒精或0.02％CPC(cetylpyridiniu mchloride)激活。PPO1活性最强，PPO3次之，而PPO2最低。对于PPO1和PPO3，30％酒精比0.02％CPC激活效果明显；对于PPO2，0.02％CPC比30％酒精激活效果明显。　　 3．随诱导时间增加PPO1的表达量变化。在16℃诱导时，在最初的12h内，随着诱导时间增加，表达量也增加，第12h时表达量最高。　　 4.30％酒精和铜离子处理先后顺序对PPO1的活性影响。结果表明：在检测PPO1的活性时，不论酒精和铜离子那种试剂先加，都可以检测到明显活性，但先加铜离子后再用酒精激活比先加酒精后加铜离子的活性高。　　 5．纯化PPO蛋白与铜离子的剂量效应。原核表达后纯化果蝇三个PPO蛋白，当培养基或溶液中没有铜离子时，它们都没有活性。对于PPO1和PPO3，铜离子浓度在210μM时活性已经很高；对于PPO2，铜离子浓度至少100μM时，才有较高活性；当铜离子大于500μM时，活性开始降低；达到2000μM时，几乎没有活性或很低。　　 本文建立的方法有利于今后对3种PPO蛋白特性和功能研究，有利于大量表达和纯化昆虫特异的重组PPO，而利用传统的蛋白纯化方法很难做到这点。