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目的:为了探讨FOXM1对EGFR突变晚期肺腺癌患者使用EGFR-TKI靶向治疗疗效的影响,本课题经过检测相应肺腺癌患者病理组织中FOXM1的表达,剖析其与患者临床病理特征的相关性,还从体外细胞实验的角度对FOXM1在肺腺癌EGFR突变细胞株中的表达及对其细胞生物学功能的影响进行研究,同时研究其对EGFR突变细胞株对厄洛替尼敏感性及相关耐药初步研究。旨在为FOXM1作为EGFR突变肺腺癌患者靶向治疗的分子标志物奠定基础,同时也为临床上解决EGFR-TKI耐药提供理论依据。方法:1)收集新疆医科大学附属肿瘤医院2011年至2014年经组织病理证实的肺腺癌患者的石蜡标本140例进入本研究,均为EGFR敏感突变。采用探针扩增增阻滞突变系统(ARMS)对以上患者的EGFR基因进行检测,采用荧光定量PCR检测部分组织样本中的FOXM1 m RNA,选择免疫组化法检测组织样本中FOXM1蛋白的表达,剖析其与患者临床病理特征和预后的关系;2)分别采用荧光定量PCR和western blot法检测含有同样位点突变的EGFR敏感突变细胞株HCC827和H1650细胞中FOXM1 mRNA和蛋白的表达。采用MTT法检测采用不同浓度梯度厄洛替尼作用后EGFR敏感突变细胞株HCC827和H1650的增殖抑制率。将HCC827细胞分为HCC827组(常规培养不做任何处理)和HCC827+Erlotinib组(加入100 uM厄洛替尼作用);将H1650细胞分为H1650组(常规培养不做任何处理)和H1650+Erlotinib组(加入100uM厄洛替尼作用),选择Transwell小室方法来检测各组细胞侵袭力的差别,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力;3)构建FOXM1过表达慢病毒载体并将之转染293T细胞用以包装病毒,将病毒收集好感染HCC827和H1650细胞,用以获得FOXM1过表达HCC827和H1650细胞系。设计并构建了siRNA-FOXM1质粒,随后将之分别转染人肺癌EGFR突变细胞株HCC827和H1650,用以获得FOXM1表达抑制HCC827和H1650细胞系。应用荧光定量PCR和western blot方法来检测上述细胞中FOXM1mRNA和蛋白表达情况。同时选用MTT方法来检测细胞的增殖活性,使用Transwell小室方法来检测肺癌细胞的侵袭能力,选用细胞划痕试验以检测相应细胞的迁移能力。结果:1)FOXM1 mRNA在进展期非小细胞肺腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁的正常组织(P<0.05)。在140例晚期肺腺癌患者当中,阳性表达为58例,阴性表达与82例,阳性表达率为41.43%。FOXM1蛋白的表达与NSCLC患者的年龄、性别、临床分期、吸烟史以及PS评分无关(P>0.05),而与晚期肺腺癌患者的肿瘤分化程度、淋巴结转移状态有关。FOXM1蛋白表达阴性者的PFS显著长于FOXM1蛋白表达阳性的患者(P<0.05)。总生存方面,FOXM1蛋白表达阴性患者的OS较FOXM1蛋白表达阳性患者有着显著延长。(P<0.05)。单因素分析后的结论显示,肿瘤的组织分化程度的区别、分期的不同、淋巴结转移的有无及FOXM1的表达为影响晚期非小细胞肺腺癌患者预后的相关因素(P<0.05)。而患者的年龄、性别、是否吸烟、PS评分、是否手术与预后不相关(P>0.05)。选用COX模型予以多因素生存分析。结果表明肿瘤的分化程度、淋巴结转移情况及FOXM1表达情况对晚期肺腺癌患者的预后有影响(P<0.05);2)H1650细胞相比,HCC827细胞中FOXM1 mRNA的表达水平明显减少(P<0.05)。与H1650细胞相比,HCC827细胞中FOXM1蛋白的表达水平明显减少(P<0.05)。在逐渐增高浓度的靶向药物厄洛替尼的作用下,H1650组和HCC827组细胞的增殖抑制率逐渐增高。与H1650组相比,HCC827组细胞在各浓度厄洛替尼作用时细胞的增殖抑制率明显增高(P<0.05)。Transwell小室检验方法的结论显示,与HCC827组相比,H1650组的侵袭细胞数量无明显变化(P>0.05);与HCC827组相比,HCC827+Erlotinib组的侵袭细胞数量明显减少(P<0.05)。与H1650组相比,H1650+Erlotinib组的侵袭细胞数量明显减少(P<0.05)。与H1650+Erlotinib组相比,HCC827+Erlotinib组侵袭细胞数量明显减少(P<0.05)。细胞划痕实验检测结果表明,与HCC827组相比,H1650组细胞的迁移距离无显著改变(P>0.05);与HCC827组相比,HCC827+Erlotinib组细胞的迁移距离明显减少(P<0.05)。与H1650组相比,H1650+Erlotinib组的迁移距离明显减少(P<0.05)。与H1650+Erlotinib组相比,HCC827+Erlotinib组的迁移距离明显减少(P<0.05);3)荧光定量PCR检测结果表明,在HCC827细胞中,感染FOXM1慢病毒后(HCC827-FOXM1组)细胞中FOXM1mRNA的表达水平明显高于HCC827-NC组(P<0.05);转染siRNA-FOXM1后(HCC827-siFOXM1组)细胞中FOXM1 mRNA的表达水平明显低于HCC827-siNC组(P<0.05)。在H1650细胞中,感染FOXM1慢病毒后(H1650-FOXM1组)细胞中FOXM1 mRNA的表达水平明显高于H1650-NC组(P<0.05);转染siRNA-FOXM1后(H1650-siFOXM1组)细胞中FOXM1 m RNA的表达水平明显低于H1650-siNC组(P<0.05)。western blot方法检测结论显示,在HCC827细胞中,感染FOXM1慢病毒后(HCC827-FOXM1组)细胞中FOXM1蛋白的表达水平明显高于HCC827-NC组(P<0.05);转染siRNA-FOXM1后(HCC827-siFOXM1组)细胞中FOXM1蛋白的表达水平明显低于HCC827-siNC组(P<0.05)。在H1650细胞中,感染FOXM1慢病毒后(H1650-FOXM1组)细胞中FOXM1蛋白的表达水平明显高于H1650-NC组(P<0.05);转染siRNA-FOXM1后(H1650-si FOXM1组)细胞中FOXM1蛋白的表达水平明显低于H1650-siNC组(P<0.05)。MTT检测结果显示,在HCC827细胞中,HCC827-FOXM1组细胞的增殖抑制率明显低于HCC827-NC组(P<0.05);HCC827-siFOXM1组细胞的增殖抑制率明显高于HCC827-si NC组(P<0.05)。在H1650细胞中,H1650-FOXM1组细胞的增殖抑制率明显低于H1650-NC组(P<0.05);H1650-siFOXM1组细胞的增殖抑制率明显高于H1650-siNC组(P<0.05)。Transwell小室方法检验的结论表明,在HCC827细胞中,HCC827-FOXM1组侵袭细胞数量明显高于HCC827-NC组(P<0.05);HCC827-siFOXM1组侵袭细胞数量明显低于HCC827-siNC组(P<0.05)。在H1650细胞中,H1650-FOXM1组侵袭细胞数量明显高于H1650-NC组(P<0.05);H1650-siFOXM1组侵袭细胞数量明显低于H1650-siNC组(P<0.05)。细胞划痕试验检测结论表示,在HCC827细胞中,HCC827-FOXM1组细胞的迁移距离明显长于HCC827-NC组(P<0.05);HCC827-siFOXM1组细胞的迁移距离明显短于HCC827-siNC组(P<0.05)。在H1650细胞中,H1650-FOXM1组细胞的迁移距离明显长于H1650-NC组(P<0.05);H1650-siFOXM1组细胞的迁移距离明显短于H1650-siNC组(P<0.05)。结论:1)FOXM1在大部分晚期非小细胞肺腺癌的肿瘤组织中表现为高表达,与肿瘤的分化程度、淋巴结转移状态有关;FOXM1蛋白表达阳性者PFS是6个月,而其表达阴性的患者PFS是10个月,总生存方面,FOXM1蛋白表达阳性与表达阴性晚期肺腺癌患者的OS分别为18个月和28个月。单因素分析的结论表明,肿瘤组织分化程度差别、分期的早晚、淋巴结转移的有无以及FOXM1的表达异同均是会影响到晚期肺腺癌患者预后的相干因素,COX模型进行多因素生存分析结果表明肿瘤的分化程度、淋巴结转移情况及FOXM1表达情况对晚期肺腺癌患者的预后有影响;2)FOXM1在H1650细胞中的表达水平明显高于HCC827细胞,且H1650细胞在厄洛替尼作用后的侵袭和迁移能力显著高于HCC827细胞,而增殖抑制率低于HCC827细胞;3)当FOXM1的表达程度出现升高后,HCC827、H1650细胞的增殖、侵袭和转移能力随之增高;而当FOXM1表达被抑制后,HCC827、H1650细胞的增殖、侵袭和转移能力明显下降。