近年来,随着诊断水平的提高,越来越多的气管狭窄患者被发现。其中,损伤性（如气管插管、气管切开后）气管狭窄在临床中尤为常见。损伤性气管狭窄直接影响患者的身体健康和生活质量,严重威胁患者的生命安全,给家庭以及社会造成沉重的负担。因此,进行损伤性气管狭窄作用和调控的研究,具有重要的临床意义。防治损伤性气管狭窄,应重点针对气管狭窄肉芽组织的纤维改变和炎症反应等系列的病理生理改变,采取有效的措施减轻或阻止成纤维细胞的增殖和胶原纤维的合成。部分研究表明,兔气管损伤性气管狭窄模型中存在显著纤维改变及炎症反应,组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase2,HDAC2）在抑制炎症和脏器纤维化中起到重要作用。尼达尼布（Nintedanib,NB）是一种多重酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine Kinase Inhibitors,TKI）,作为新型抗纤维化药物,不仅能减轻炎症反应,并且可以直接抑制肺组织纤维化。此前,国内外尚无尼达尼布用于气管狭窄方面的相关研究。尼达尼布是否能抑制气管纤维组织形成及炎症反应,从而预防和治疗损伤性气管狭窄,尚待研究。此外它对控制炎症反应的HDAC2是否有调控作用,亦有待进一步研究。本课题初步探讨了纤维组织增生和炎症改变在损伤性兔气管狭窄中的作用以及药物调控的研究;并在组织细胞水平观察HDAC2及多个炎症因子在兔气管狭窄肉芽组织和人胚肺成纤维细胞中的表达,并进行了药物调控的相关研究。本课题研究分为以下三部分:第一部分兔损伤性气管狭窄纤维改变和炎症变化及调控的研究目的:探讨兔气管损伤性气管模型中纤维改变及炎症反应的变化趋势,研究尼达尼布、布地奈德对气管损伤性狭窄的干预作用。方法:将30只新西兰兔随机分为5组,每组6只。其中A组为正常对照（NC）组,B组为模型（Model）组,C组为生理盐水（Model+NS）组,D组为尼达尼布（Model+Nintedanib）组,E组为布地奈德（Model+Budesonide）组。正常对照组不做处理,其余四组均建立损伤性气管狭窄模型。除正常组外,剩余四组在造模后第1~10天分别予相应药物处理。在术后第11天收集血清和肺泡灌洗液,使用ELISA法分别测量各组血清和肺泡灌洗液中TGF-β1、VEGF、IL-8的浓度。收集气管标本,测量各组气管狭窄度,并行HE染色,观察各组气管组织的损伤与修复情况。结果:1.BE组血清、肺泡灌洗液中TGF-β1、VEGF、IL-8水平均高于A组,差异有统计学意义（P<0.05）。B、C组对比差异无统计学意义,D、E组水平均低于B组,差异有统计学意义（P<0.05）。干预组对比,D组水平低于E组,差异有统计学意义（P<0.05）。2.气管狭窄度:与A组对比,BE组气管可见不同程度肉芽组织增生导致的狭窄。AE组气管狭窄度分别为[（20.52±3.23）%、（62.79±5.55）%、（61.48±3.77）%、（31.62±2.44）%、（35.05±2.00）%],B组狭窄度最高,A组狭窄度最低,B、C两组对比差异无统计学意义,D、E组狭窄度均低于B组,差异有统计学意义（P0.05）。与A组对比,B、C组HDAC2 m RNA表达量下降,IL-8、VEGF m RNA表达量增加,差异有统计学意义（P<0.05）。与B组对比,D、E组的HDAC2m RNA表达量增加,IL-8、VEGF m RNA表达量下降,差异有统计学意义（P<0.05）。2.Western blot检测:B、C组气管组织中HDAC2的蛋白表达低于A组,差异有统计学意义（P<0.05）。与B组对比,D、E组的HDAC2蛋白表达量升高,差异有统计学意义（P<0.05）。D组HDAC2蛋白表达量高于E组,差异有统计学意义（P0.05）。D、E组的HDAC2免疫荧光表达较B组增强,差异有统计学意义（P0.05）。D组与E组CollagenⅠ与CollagenⅢ表达量较B组有所降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1.HDAC2在兔损伤性气管狭窄肉芽组织中的表达下调。2.尼达尼布、布地奈德可能是通过上调HDAC2的水平,减轻气管损伤性狭窄的纤维改变及炎症反应,减少CollagenⅠ与CollagenⅢ的形成。第三部分尼达尼布减轻人胚肺成纤维细胞炎症反应的初步研究目的:探讨尼达尼布对脂多糖刺激下人胚肺成纤维细胞炎症指标的影响及可能的干预机制。方法:体外培养人胚肺成纤维细胞（WI-38）,分为正常对照（NC）组,脂多糖（LPS）组,尼达尼布（NB）组。脂多糖组予100ng/ml脂多糖干预成纤维细胞,尼达尼布（NB）组先予以10mg/L尼达尼布干预细胞2小时,再用脂多糖干预细胞24小时。应用ELISA法检测各组细胞上清液中IL-8、VEGF的表达情况。应用实时荧光定量PCR检测细胞HDAC2、IL-8、VEGF mRNA的相对表达量。结果:1.与NC组对比,LPS组和NB组细胞上清IL-8、VEGF浓度升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与LPS组对比,NB组细胞上清IL-8、VEGF浓度降低,差异有统计学意义（P<0.05）。2.实时荧光定量PCR检测:三组细胞的HDAC2 m RNA（1.00±0.00、0.56±0.06、0.85±0.08）、IL-8 m RNA（1.00±0.00、4.99±0.95、2.72±1.11）、VEGF m RNA（1.00±0.00、2.81±0.59、1.85±0.27）的相对表达量各组对比差异均有统计学意义（均P<0.05）。与NC组对比,LPS组和NB组HDAC2 m RNA相对表达量降低,IL-8 m RNA、VEGF m RNA相对表达量升高;与LPS组对比,NB组HDAC2 m RNA相对表达量升高,IL-8 m RNA、VEGF m RNA相对表达量降低（均P<0.05）。结论:1.人胚肺成纤维细胞HDAC2在脂多糖的作用下表达下调,减轻了对炎症因子的抑制作用。2.尼达尼布可能上调脂多糖刺激下人胚肺成纤维细胞中HDAC2的表达,下调IL-8、VEGF的表达,减轻了炎症反应。3.尼达尼布有望成为损伤性气管狭窄及再狭窄的潜在治疗药物。