伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)作为猪的一种重要病原体,在全球广泛传播。长期以来,PRV受到兽医学家、病毒学家以及神经生物学家的广泛关注及研究,目前对PRV的研究已经为疱疹病毒发病机制提供了相当全面的参考依据。2018年中国上海报道了首例人类感染PRV的情况,引起相关研究学者们强烈重视。单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus,HSV)UL12基因编码一种碱性核酸酶(Alkaline nuclease,AN),AN由疱疹病毒科基因组中共同保守序列编码。有研究报道HSV UL12诱导的mtDNA应激反应引发先天性抗病毒反应,本研究以PRV UL12基因为研究对象,对其相关功能做出初步探究。主要内容为:1.pEGFP-N1-UL12重组质粒的构建与PRV UL12蛋白生物信息学分析参考GenBank中PRV UL12基因序列设计特异性引物,以PRV-XJ株为模板,PCR扩增UL12目的基因并成功构建pEGFP-N1-UL12重组质粒;通过生物信息学方法针对PRV UL12氨基酸的序列进行分析预测。2.PRV UL12真核表达及其细胞定位将pEGFP-N1-UL12转染至BHK21细胞中表达,Western blot验证UL12蛋白成功表达,且培养液上清及细胞中均检测到目的蛋白;通过细胞定位检测UL12-GFP融合蛋白,结果显示UL12基因产物同时分布于细胞核与胞浆中。3.PRV UL12基因的相关功能研究相同方法转染表达PRV UL12后,观察UL12-GFP绿色荧光蛋白;流式细胞术检测细胞凋亡情况;以β-actin为内参,相对荧光定量测定细胞caspase-3基因表达水平;绝对荧光定量测定转染表达UL12的BHK21细胞接毒PRV后gB表达水平,绘制一步生长曲线以监测PRV增殖动态。结果显示实验组细胞的荧光形态相较于空载组显著变圆;实验组细胞凋亡率明显升高;caspase-3无显著差异表达;实验组病毒含量较对照组轻微降低。综上所述,本研究首次以PRV-XJ株为模板扩增UL12基因,构建了pEGFP-N1-UL12重组质粒,对PRV UL12基因相关功能做出初步研究,同时亦为HSV UL12基因未来的探索方向提供部分参考依据。