【摘 要】
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生物体在新陈代谢过程中会不断产生各种氧自由基,适量的氧自由基对维持机体的健康具有重要的作用,但当氧自由基生成过多时,则会导致机体的氧化损伤,从而引起多种疾病,如癌症、动脉粥样硬化、老年痴呆等。酸枣叶,鼠李科枣属植物酸枣Ziziphus jujuba Mill var.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chow的叶子,具有宁心安神,镇静催眠之效。研究表明,酸枣叶中含有多种天然化合物,包
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生物体在新陈代谢过程中会不断产生各种氧自由基,适量的氧自由基对维持机体的健康具有重要的作用,但当氧自由基生成过多时,则会导致机体的氧化损伤,从而引起多种疾病,如癌症、动脉粥样硬化、老年痴呆等。酸枣叶,鼠李科枣属植物酸枣Ziziphus jujuba Mill var.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chow的叶子,具有宁心安神,镇静催眠之效。研究表明,酸枣叶中含有多种天然化合物,包括皂苷、酚酸、黄酮类化合物等,其中以皂苷类化合物为主要成分。然而,迄今为止,尽管酸枣叶皂苷在医疗保健领域具有巨大潜力,但几乎没有关于酸枣叶皂苷的研究。因此,本课题采用响应面法优化酸枣叶皂苷的超声辅助提取工艺,并利用多种体外抗氧化活性研究方法探究其抗氧化活性。在此基础上,以秀丽隐杆线虫为模型,研究酸枣叶皂苷对秀丽隐杆线虫氧化损伤的保护作用。研究成果如下:(1)运用响应面法优化酸枣叶皂苷的超声辅助提取工艺,考察显著影响酸枣叶皂苷提取率的因素水平。在单因素实验的基础上,以液料比、乙醇浓度、超声功率和超声时间这四个因素为自变量,以酸枣叶皂苷提取率作为响应值,设计四因素三水平响应面实验,优化提取工艺参数。结果表明各因素对酸枣叶皂苷提取率的影响依次为:液料比﹥超声功率﹥乙醇浓度﹥超声时间,优化的最佳提取工艺条件如下:液料比36:1 mL/g、乙醇浓度50%、超声功率381W、超声时间50min,酸枣叶皂苷实际提取率为15.54±0.19%,与预测值15.41%相比无显著性差异,响应面模型与实际情况拟合良好,能较好地预测酸枣叶皂苷提取率。(2)利用多种体外抗氧化活性方法研究酸枣叶皂苷的抗氧化活性。在所考查的样品浓度范围内,酸枣叶皂苷的还原力随着样品浓度的升高而增加,并且呈现出较好的量效关系,其中0.92mg/mL的酸枣叶皂苷的还原力与60.00μg/mL的VC相当,皂苷的总还原力约是VC的0.0652倍。酸枣叶皂苷对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基均具有清除作用,且存在剂量依赖关系,均呈现出良好的线性关系,由此可计算出酸枣叶皂苷对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基的半数清除浓度(IC50)分别为1.19、0.35、0.38mg/mL,清除能力分别是VC的0.0165、0.0488、0.1406倍。(3)以秀丽隐杆线虫为模型,利用急性氧化应激实验、趋化性实验、荧光显微检测、酶活性检测等方法,考察酸枣叶皂苷抗秀丽隐杆线虫氧化损伤作用的影响。研究结果表明,与对照组相比,酸枣叶皂苷能有效增强秀丽隐杆线虫对热应激、H2O2诱导的氧化应激的抗性,增强秀丽隐杆线虫对氯化钠、丁酮的化学感知能力,抑制氧化损伤导致的秀丽隐杆线虫体内ROS的累积,抑制GST-4、SOD-3、GSH-Px、SOD酶活力的降低,抑制MDA含量的增加,表现出良好的抗氧化损伤作用。
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