柑橘是全球最重要的水果之一。青霉、绿霉病是柑橘果实最主要的采后真菌病害,是造成腐烂损失的重要原因。虽然化学杀菌剂可以有效的控制一部分微生物病害的发生,但它存在增强病原菌耐药性以及危害环境和人体健康等问题,所以人们一直寻找能够代替化学杀菌剂的控制病害的技术。利用拮抗酵母来防治采后微生物病害被认为是最有潜力的方法之一。本研究以柑橘果实(Citrus reticulata Banco)为试材,研究膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)对柑橘青绿霉病害的防治效果以及拮抗机制。主要讨论了膜醭毕赤酵母不同处理液、处理浓度、接种时间顺序对抑菌效果的影响以及酵母在果实伤口处的生长动态,并将酵母与一定浓度的外源化学物质进行复合,进一步考察酵母复合保鲜剂对柑橘果实贮藏品质的影响,同时对可能的拮抗机制如竞争养分空间机制和诱导抗病性机制进行讨论。主要研究结论如下：(1)在离体条件下,无论是酵母与病原菌同孔或异孔生长,对青绿霉菌生长都有明显抑制作用。说明酵母与青绿霉病原菌间存在强烈的竞争关系,其抑菌机制可能是竞争养分空间机制。另外,平板上酵母菌菌落周围无抑菌圈的现象可以得出该酵母不能产生抑菌的次生代谢产物,即该酵母没有抗生机制和重寄生机制。(2)用1×108 CFU·mL-1的酵母悬浮液接种和浸泡柑橘果实的柑橘青绿霉病害发病率和病斑直径都小于对照,酵母浸泡处理果实的自然发病率也明显小于对照果实。这表明,P.membranaefaciens对柑橘青、绿霉病有很好的防治潜力,其抑菌机制可能与营养竞争以及诱导抗病性有关。(3)拮抗酵母的生防效果与拮抗菌液类型、处理浓度以及接种时间有关。用不同类型的酵母处理液处理柑橘果实,发现热杀死液利培养滤液基本不能抑制病害,反而加重病害。酵母细胞悬浮液和培养原液的控病效果较好,其中悬浮液的效果最优。酵母的拮抗效果与拮抗菌的浓度成正比,当悬浮液浓度为1×108 CFU·mL-1时,可以很好的控制青霉及绿霉病害。酵母先于病原菌24 h或者48 h接种,4d后可完全抑制青、绿霉病的发生。这进一步说明了酵母的抑制机制可能与营养竞争有关。(4)酵母能够在柑橘果实伤口处迅速定殖,快速增长,且能适应大幅度的环境温度变化而持续有效。在4℃和20℃下,拮抗酵母菌接种48 h以后可在果实的伤口处快速繁殖,酵母数量都分别增加4倍和11倍以上。这说明酵母具备作为商业生物保鲜剂进行开发的前提条件。(5)用酵母接种和浸泡处理柑橘果实都可以诱导果实抗病性的增强,这种作用可能是通过诱导柑橘果实防御酶活性的提高或者植保素的合成实现的。酵母接种和浸泡处理柑橘果实后,柑橘果皮组织的总酚、类黄酮含量以及过氧化物酶(peroxidase, POD)、多酚氧化酶(polyphenoloxidase, PPO)、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase, PAL)、几丁质酶(chitinase, CHI)和β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-glucanase, GLU)等酶的活性得到诱导提高。(6)用酵母接种和浸泡处理柑橘果实都可以诱导提高果实的超氧化物歧化酶(superoxide distmuase, SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase, APX)及谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)的活性,同时诱导过氧化氢(hydrogen peroxide, H2O2)、超氧阴离子(superoxide anion, O2-)还原谷胱甘肽(glutathione, GSH)和抗坏血酸(ascorbic acid, AsA)含量的提高,但抑制了过氧化氢酶(catalase, CAT)的活性。这说明酵母所诱发的柑橘果实抗病反应中涉及活性氧水平的高低及抗氧化酶活性和抗氧化剂水平的变化。(7)将外源化学物质与酵母拮抗菌混合使用能够显著提高拮抗酵母菌对柑橘青绿霉病害的抑菌能力。同时,酵母液及酵母复合其他物质后的复合保鲜剂对柑橘果实贮藏品质都无不良影响,并且在一定程度上延缓了柑橘的成熟衰老,提高了贮藏品质。