【摘 要】
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目的:细胞水平探讨激活线粒体乙醛脱氢酶2（Acetaldehyde dehydrogenase,ALDH2）可以通过调节Ca N/NFATc3信号通路及双孔钾通道TASK-1,减轻肺动脉平滑肌细胞的增殖,分析ALDH2在缺氧性肺动脉高压中的作用。方法:从SD大鼠中分离培养大鼠原代肺动脉平滑肌细胞（Pulmonary artery smooth muscle cell,PASMC）,将PASMC分为
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81970313），线粒体ALDH2调控的双孔钾通道TASK-1对缺氧性肺动脉高压保护及机制; 安徽省自然科学基金青年项目（1908085QH353）; 安徽省高校自然科学研究重大项目（KJ2018ZD023）; 安徽省高校学科（专业）拔尖人才学术资助重点项目（gxbjZD2016072）; 蚌埠医学院研究生科研创新计划项目（Byycx20026），线粒体ALDH2通过调
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目的:细胞水平探讨激活线粒体乙醛脱氢酶2（Acetaldehyde dehydrogenase,ALDH2）可以通过调节Ca N/NFATc3信号通路及双孔钾通道TASK-1,减轻肺动脉平滑肌细胞的增殖,分析ALDH2在缺氧性肺动脉高压中的作用。方法:从SD大鼠中分离培养大鼠原代肺动脉平滑肌细胞（Pulmonary artery smooth muscle cell,PASMC）,将PASMC分为6组,常氧组（CON）,常氧+ALDH2激动剂组（NA）,缺氧组（H）,缺氧+ALDH2激动剂组（HA）,缺氧+ALDH2抑制剂组（HD）,缺氧+ALDH2激动剂+ALDH2抑制剂组（HAD）。通过免疫荧光鉴定肺动脉平滑肌细胞;CCK-8检测各组细胞活性;划痕实验观察各组细胞增殖状况及迁移能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Mito Sox检测各组线粒体ROS水平;荧光共定位观察TASK-1亚细胞定位;Western Blot检测各组ALDH2、Ca N、NFATc3、TASK-1等蛋白的表达;免疫共沉淀确定蛋白结合情况。结果:1.CCK-8检测细胞活性:与CON组相比,H、HD组的细胞活性显著增加;与H组相比,HA组细胞活性明显下降;2.划痕实验检测细胞增殖:与CON组相比,H、HD组的细胞活性显著增加;与H组相比,HA组细胞增殖明显降低;3.流式细胞术测定细胞凋亡:与CON组相比,H、HD组的凋亡有所降低,但变化并无统计学意义;与H组相比,HA组凋亡增加,但差异并无统计学意义。4.Mito Sox检测线粒体ROS:与CON组相比,H、HD组的ROS水平显著升高;与H组相比,HA组ROS水平下降明显;5.荧光共定位:TASK-1在肺动脉平滑肌细胞线粒体中有表达;6.蛋白表达水平:与CON组相比,H组的ALDH2、TASK-1表达降低,Ca N、NFATc3蛋白显著升高,HD、HAD组蛋白无明显改变;与H组相比,HA组ALDH2、TASK-1蛋白表达升高,Ca N、NFATc3蛋白显著减低;7.免疫共沉淀和Western Blot的结果表明:ALDH2与Ca N有直接结合,Ca N与NFATc3有直接结合。结论:1.线粒体ALDH2对缺氧性肺动脉高压有着一定的保护作用,这种保护作用可能是通过减轻氧化应激、抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖来实现的而对细胞凋亡影响较小;2.线粒体ALDH2能够直接调控Ca N/NFATc3信号通路发挥在缺氧性肺动脉高压的保护作用;3.TASK-1在线粒体中也有表达,激活线粒体ALDH2可以逆转缺氧所导致的TASK-1蛋白水平降低。
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