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[目的]本实验通过建立新生鼠缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic ischemic brain damage,HIBD)模型,采用骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)脑内移植治疗,探讨其对小鼠血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)紧密连接蛋白的影响及其对运动、认知功能及焦虑行为的影响,以期为间充质干细胞治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤提供理论依据。[方法]选取出生10天的C57BL/6小鼠随机分为四组,分别为假手术组,缺氧缺血组,安慰剂组,干细胞组。假手术组仅做颈部皮肤切开后缝合。其余三组进行左侧颈总动脉结扎,置于缺氧箱(含有8%氧气和92%氮气的混合气体)中45min。干细胞组造模24小时后通过脑立体定位仪在左侧脑室注射BMSCs,细胞量5×106/ul,5ul/只,注射时间5min,安慰剂组同一位置注射等量生理盐水。于移植后7天,通过透射电镜观察BBB超微结构,免疫印迹、免疫荧光等检测紧密连接蛋白的表达,并在出生21天后通过自由悬挂实验、新事物实验、Y迷宫实验、旷场实验以及高架十字迷宫实验等行为学实验,探究BMSCs对新生鼠HIBD的血脑屏障紧密连接蛋白及行为学的影响。[结果]1.骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤对其行为学的影响:1.1上肢运动能力:自由悬挂实验,干细胞组与假手术组比较,上肢抓握能力降低(P<0.05);缺氧缺血组及安慰剂组相比,前肢抓握能力提高(P1<0.05,P2<0.05)。1.2认知能力:1.2.1 Y迷宫实验,与假手术组相比,干细胞组新异臂停留时间及进入次数均降低,均具有统计学差异(P<0.05);与缺氧缺血组及安慰剂组相比,干细胞组新异臂停留时间及进入次数均增加,均具有显著性差异(P<0.05)。1.2.2新事物实验,与假手术组比较,干细胞组在新事物停留时间减少,旧事物停留时间增加,物体识别指数降低,均具有统计学差异(P<0.05);与缺氧缺血组及安慰剂组相比,干细胞组在新事物停留时间增加,旧事物停留时间减少,物体识别指数提高,均具有统计学差异(P<0.05)。1.3焦虑和探索行为:旷场实验,与假手术组比较,干细胞组中央区域总路程、停留时间及进入次数均减少,差异均具有统计学意义(P<0.05);与缺氧缺血组和安慰剂组比较,干细胞组停留时间延长,进入次数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤对血脑屏障紧密连接的影响:假手术组血脑屏障紧密连接完好,缺氧缺血组及安慰剂组血脑屏障紧密连接疏松,内皮细胞呈空泡样改变,而经过干细胞治疗后紧密连接疏松程度减轻3.骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤对血脑屏障紧密连接蛋白的影响:与缺氧缺血组及安慰剂组相比,干细胞组血脑屏障紧密连接蛋白claudin-5、occludin、caveolin-1表达量增加,具有统计学差异(P<0.05)。[结论]1.新生鼠发生缺氧缺血性脑损伤后运动能力、认知能力下降及出现焦虑行为,骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤可以改善运动及认知功能,减少焦虑行为;2.骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤,紧密连接蛋白表达增加,促进血脑屏障修复;3.骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤改善运动及认知功能,减少焦虑行为可能与其促进血脑屏障修复有关。