具有共生作用乳酸菌与酵母菌培养基优化及促生物质的分离

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 10次 | 上传用户:m104129495
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以内蒙古锡盟地区酸马奶中分离出来的能够通过交互添加代谢产物而相互促进生长的一株乳酸菌LC5和一株酵母菌YE4为研究菌株,进行菌种培养基优化及酵母菌YE4代谢产物中能够促进乳酸菌LC5生长的促生物质产生动力学研究,并且对促生物质进行初步分离。通过对乳酸菌和酵母菌各自五种常用的培养基进行筛选,选出适合酵母菌YE4生长的YPD培养基和乳酸菌LC5生长的M17培养基作为各自的基础培养基。基础培养基成分的优化采用单因素试验和正交试验,获得YPD和M17的改良配方,对优化前后培养基对比发现:改良YPD培养基中酵母菌YE4的OD值为1.952,是基础培养基的1.06倍;活菌数比基础培养基YPD高一个数量级,可达到5.01×10~8cfu/ml,且二者之间差异显著(P<0.05)。因此,YPD培养基的改良效果是明显的。同样,改良M17培养基中乳酸菌LC5的OD值可达到1.537,是基础培养基的1.22倍;活菌数为9.2×10~8cfu/ml是基础培养基M17的5.97倍;且M17较改良M17培养基的pH值低。因此,M17培养基的改良效果也是显著的(P<0.05)。对酵母菌YE4代谢产物产生的动力学研究发现,酵母菌YE4在60h时所产的代谢物对乳酸菌LC5的促进作用最好,因此,酵母菌YE4代谢产物的制备条件为30℃振荡培养60±2h。且代谢产物的添加量为40%时对乳酸菌LC5的促进作用效果最好。通过对酵母菌YE4代谢产物的超滤发现代谢产物中分子量为10KD<M<30KD的物质对乳酸菌LC5的促进作用最佳,因此,把该分子量的物质称为酵母菌YE4对乳酸菌LC5生长的促生物质。促生物质在波长为190-700nm的紫外分光光度计扫描发现,其在243nm和301nm时出现两个吸收峰,故将该物质初步的认为是蛋白或肽类物质的混合物。经过80%硫酸铵沉淀促生物质,再依次经SephadexG-75和SephadexG-50凝胶柱层析,分离得到对乳酸菌LC5有促进作用的物质。该物质电泳后呈现六条条带,其中一条分子量小于14.4KD,其它几条分子量分别约为15.2KD、17.6KD、19.1KD、21.3KD和23.8KD。
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