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目的PUMA(p53 up-regulated modulator ofapoptosis)基因是近年来发现的具有强大的促凋亡作用的Bcl-2家族BH3-only亚家族的成员，它可以通过p53依赖途径以及p53非依赖途径促进细胞凋亡。本实验拟通过免疫组化技术检测PUMA在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达，探讨PUMA在结肠癌发生、发展中的作用及其临床意义。同时通过5-Fu诱导携带有野生型p53基因的HCTll6和携带有突变型p53基因的HT-29两种结肠癌细胞株，比较两种细胞在各时间点凋亡水平和PUMA mRNA表达情况的差异，从而探讨PUMA对细胞凋亡的作用及诱导其表达的基本途径。方法选取72例结肠癌组织标本以及部分相应的癌旁正常组织标本30例，通过s-p免疫组化法分别检测PUMA在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达情况，分析PUMA在结肠癌中的表达与临床病理分期、肿瘤分化程度、肿瘤生长的部位、术前化疗、淋巴结转移之间的关系。用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测不同结肠癌细胞株HT-29、HCT116在抗肿瘤药物5-Fu作用下不同时间点结肠癌细胞株内PUMA mRNA表达水平的差异，用吖啶橙／溴化乙啶(AO／EB)荧光染色检测各时间点细胞的凋亡水平，并分析其与pLrMAmRNA表达水平之间的关系。结果PUMA在结肠癌组织中的阳性表达率为37.11％，在癌旁正常组织中的阳性表达率为26.67％，两者之间无显著差异(P＞0.05)；不同部位的结肠癌组织比较，PUMA在近段结肠癌组织中的阳性表达率为53.12％，远段结肠癌组织中的阳性表达率为22.50％，两者有差异(P＜0.05)；术前行化疗的患者结肠癌组织中PUMA表达阳性率为71.43％，未行化疗的患者结肠癌组织中PUMA表达阳性率为22.50％，两者有差异(P＜0.05)；在不同年龄、性别、临床病理分期、肿瘤病理分化程度、是否伴有淋巴结转移的结肠癌组织中，PUMA的表达无显著性差异(P＞0.05)。携带有野生型P53基因的结肠癌细胞株HCT116在5-Fu作用下6h即可出现PUMA mRNA的表达，随着药物作用时间的延长其表达强度增加，并且与细胞凋亡水平呈正相关；含有突变型P53基因的结肠癌细胞株HT-29在5-Fu作用下无PUMA的表达。结论1．在人结肠癌组织与癌旁正常组织中PUMA的表达无显著差异；结肠癌组织中PUMA的表达与结肠癌部位相关，近段结肠癌组织中PUMA阳性率及表达强度均高于远段结肠癌；同时PUMA的表达与是否术前化疗相关，术前化疗组的PUMA表达阳性率及表达强度均高于未行化疗组；PUMA的表达与年龄、性别、临床病理分期、肿瘤病理分化程度、是否伴有淋巴结转移无关。2．通过5-Fu诱导细胞凋亡出现的PUMA表达主要依赖p53途径，且需要野生型P53基因，突变型P53基因无法诱导Puma的表达。3．PUMA与结肠癌细胞凋亡水平呈正相关，是一种促凋亡蛋白。