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背景结直肠癌(CRC)的发病率由高到低依次为直肠、乙状结肠、盲肠、升结肠、降结肠及横结肠,是一种比较常见的消化道恶性肿瘤。结直肠癌的发病与生活方式、饮食习惯、遗传等密切相关,而且随着人们生活方式的改变、生活质量的提高,结直肠癌发病也越来越年轻化。由于肠道解剖学及功能特点,早期结直肠癌往往症状不典型,或者没有症状,容易被忽视,患者确诊时相对处于疾病的中晚期,即使可以手术治疗的患者也要接受进一步的化疗、生物治疗等,给患者及其家庭带来了很大的经济负担和精神压力。即使对CRC患者进行了积极的治疗,但是由于手术后复发转移、化疗耐药等问题的出现,大多数CRC患者总体预后较差,生活质量不佳。为诊断或评估CRC,在临床工作中常用的肿瘤标志物包括癌胚抗原(CEA)和糖类抗原(CA19-9),但是由于这些肿瘤标志物的特异性不理想,且指标易受其它多种机体因素影响,对疾病的预测及评估功能有限。因此急需寻找新的肿瘤标志物以及评估患者预后较灵敏的指标,为CRC患者的诊断和治疗找到新的靶点和方向。WNK1[不含赖氨酸(K)-1]是一种250kDa的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其在机体中广泛表达,现研究较多的是在集合管远端肾单位表达的WNK1。研究发现WNK1在维持细胞水电解质平衡中起着重要的作用,并参与遗传性高血压疾病的发生发展过程。WNK1可通过多种机制调节不同细胞和器官的功能,在多种病理生理过程中均起到一定的作用。MONIZ S等人研究发现WNK1在肿瘤性疾病中有重要影响,主要通过调节肿瘤细胞增殖、代谢适应、凋亡逃避、浸润转移发挥作用。在HEK293T细胞中下调WNK1和WNK2,可以显著降低发育的核心Wnt信号基因的表达,表明敲除WNK1、WNK2基因可以降低HEK293T细胞的活性。Vegf/Vegfr信号通路可以调控血管生成,其机制是通过调控Akt激酶介导的磷酸化和WNK1的激活。ZHANG等研究血管生成相关影响因素时发现,WNK1作为细胞质第二信使参与C1-通道诱导的信号级联反应,促进血管增生。新生血管的生成对于肿瘤的生长及转移是非常重要的,结合既往关于WNK1的研究推测,WNK1基因的表达可能对肿瘤细胞的侵袭性行为有一定的影响。据报道,CRC中WNK1基因的拷贝数是异常的,但WNK1对CRC临床特征的具体影响及其机制尚不清楚。本研究通过检测WNK1在CRC中的表达情况,分析WNK1与CRC患者临床病理特征及预后指标的关系,并进一步研究WNK1对CRC细胞发生作用的机制,明确WNK1对CRC的影响。目的:研究WNK1在CRC组织及其癌旁组织中表达情况及其对CRC细胞迁移的作用;分析WNK1对CRC患者临床效应指标的影响。方法:1.本研究所使用的68例CRC组织样本由上海芯超生物科技有限公司组织标本库提供。根据第八版结直肠癌TNM分期标准对病例进行临床病理分期。其中男性41例,女性27例,平均年龄55岁。每个研究标本均提供癌组织及癌旁组织,癌旁组织距离癌组织1.5 cm。WNK1基因在CRC组织及其癌旁组织中的表达情况用免疫组化法检测。2.数据分析用SPSS 21.0统计软件进行操作。采用χ2检验评估WNK1在癌组织及癌旁组织表达情况以及WNK1表达情况与CRC临床病理特征间的关联。采用log-rank检验和Kaplan-Meier生存曲线分析WNK1表达水平与总生存期(overall survival,OS)和无进展生存期(progression-free survival,PFS)的关系。计量资料以(x±s)表示,两组间比较采用独立样本t检验。设定P<0.05为差异明显,有统计学意义。3.通过划痕试验和Transwell实验评估WNK1对CRC细胞迁移能力的影响。结果:1.WNK1在CRC癌组织及癌旁组织表达情况,WNK1表达情况与CRC患者临床病理特征间的关联分析结果显示:CRC组织中WNK1的表达阳性率[(55.9%(38/68)]高于癌旁组织[14.7%(10/68)],差异有统计学意义(P<0.05)。WNK1的表达与CRC患者的淋巴结转移数和TNM分期相关(均P<0.05);WNK1的表达与CRC患者的年龄、性别、肿瘤直径和肿瘤浸润深度无关(均P>0.05)。2.log-rank检验和Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示:WNK1高表达的结直肠癌患者总生存期率低于WNK1低表达患者(P<0.05),差异有统计学意义;WNK1高表达的结直肠癌患者无进展生存期率低于WNK1低表达患者(P<0.05),差异有统计学意义。3.Transwell实验结果:在HCT116细胞中采用siRNA抑制WNK1基因后通过滤膜迁移至下室的细胞(57±4.36)少于转染空载体对照组(230±8.89),差异有统计学意义(P<0.05);在HCT15细胞中采用siRNA抑制WNK1基因后通过滤膜迁移至下室的细胞(61±3.61)少于转染空载体对照组(241±5.52),差异有统计学意义(P<0.05)。4.划痕实验结果:HCT116中用siRNA下调WNK1基因后细胞48 h划痕愈合率(10.7%)低于转染空载体对照组(60.3%),差异有统计学意义(P<0.05);HCT115中用siRNA下调WNK1基因后细胞48h划痕愈合率(7.8%)低于转染空载体对照组(45.8%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.WNK1在CRC组织中表达明显高于其癌旁组织;WNK1的表达与CRC患者晚期TNM分期及淋巴结转移显著相关,提示WNK1可能是CRC患者预后不良的指标。2.WNK1高表达的CRC患者OS及PFS较短,提示WNK1高表达的CRC患者预后不良。3.抑制WNK1基因可抑制CRC细胞的迁移能力,WNK1可能在CRC中发挥促癌作用。