【摘 要】
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由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)引起的黄萎病是棉花的主要病害,严重影响棉花的生产,目前生物防治被认为是一种最具有发展潜力的有效防治方法。本研究的主要目的是
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由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)引起的黄萎病是棉花的主要病害,严重影响棉花的生产,目前生物防治被认为是一种最具有发展潜力的有效防治方法。本研究的主要目的是对实验室分离保存的棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌的拮抗细菌DS45-2菌株的产抗菌蛋白发酵条件进行了优化,并研究了蛋白提取物的部分性质及抗菌蛋白的分离纯化。首先对DS45-2菌株产抗菌蛋白发酵条件进行了优化,在不同的碳源、氮源和无机盐中,筛选出葡萄糖为碳源,大豆蛋白胨为氮源,KH2P04为主要无机盐。发酵培养基各组分配比利用SAS软件的Box-Behnken中心组合设计法进行优化,实验验证最佳培养基配方为葡萄糖0.7%,大豆蛋白胨2.2%,KH2P040.2%,pH6.5。发酵工艺参数优化采用正交设计优化方法,选用L16(45)正交表,实验验证产抗菌蛋白的最佳培养条件为：在装液量50mL/250 mL三角瓶中,接种2.0%种龄为10h的种子,于30℃,220 r/min摇床振荡培养42h,得到最大量的抗菌蛋白。发酵液经氯仿、乙酸乙酯萃取后,萃取物无抗菌活性。用硫酸铵沉淀DS45-2菌株发酵液中的抗菌蛋白,透析、真空冷冻干燥后检测抑菌活性,并对其理化性质进行了研究。抗菌蛋白提取物对胃蛋白酶和胰蛋白酶均不敏感,蛋白酶K部分敏感；对热稳定；在中性条件下抑菌活性最高,碱性条件下稳定,酸性条件下抑菌活性降低。抗菌蛋白提取物对多种病原真菌有拮抗作用。DS45-2菌株发酵液经硫酸铵分级沉淀,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和反相层析后,分离纯化出一个抗菌蛋白组分,其分子质量为23 kDa。
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